[发明专利]一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法

权利要求书

1.一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)左心室穿刺取血：小鼠经异氟烷气体诱导麻醉，将小鼠仰卧位放置并将其四肢固定，使小鼠胸部、上腹部充分暴露；对小鼠进行胸部、上腹部大范围消毒，然后在其胸骨剑突与肋骨夹角处，倾斜10°～20°对准其心尖部穿刺抽血，将动脉血迅速转移备用；

步骤2)暴露颅骨术野：用手术刀在小鼠的头皮上做一个1cm长的中线切口，擦拭清理覆盖颅骨的软组织，以暴露垂直交点，即冠状和矢状缝交合点；

步骤3)确定颅骨表面进针点：将微量进样器安装到注射泵上，并将针头立体定向到冠状和矢状缝交合点上并调零；接下来，调整立体定向操作臂，将针放置在冠状和矢状缝交合点前0.2mm和右侧旁开2mm的位置；在此坐标使用变速钻在小鼠的颅骨上钻孔；

步骤4)脑立体定位仪注射自体血：迅速抽取步骤1)备用的动脉血转移到微量进样器的玻璃筒中，将针头通过小鼠的颅骨表面钻孔处，向腹侧推进3.7mm，即可到达右侧尾壳核处，注入自体动脉血；

步骤5)静置微量进样器：完成注射后，将针头留在原位10min，然后以1mm/min的速度抽回，减少穿刺道回血，用骨蜡封住钻孔；

步骤6)消毒切口，缝合皮肤，即可。

2.根据权利要求1所述的一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，所述小鼠为KM小鼠，来源于swiss小鼠。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，步骤4)所述注入自体动脉血的注入速度为2μL/min。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，步骤6)所述缝合皮肤时，缝合处注意预防感染，适当向小鼠腹腔注射生理盐水补液。

5.根据权利要求1所述的一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，还包括步骤7)：于术后24h对小鼠采用adhesive removal试验评估或进行神经功能缺损评分，符合评估/评分标准的小鼠即为造模成功的小鼠。

6.根据权利要求5所述的一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，所述adhesive removal试验的步骤如下：将0.3cm×0.4cm的胶带贴在小鼠对侧受伤的前爪上；通过记录去除胶带的时间，测量触觉运动反应，最大观察时间为120s；去除胶带的时间＞10s为造模成功的小鼠。

7.根据权利要求5所述的一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，其特征在于，所述神经功能缺损评分的步骤如下：

(1)将小鼠置于空旷的平台表面自由活动2～5min；

(2)将小鼠置于45°网格斜面60s；

(3)将小鼠提尾倒立30s；

(4)将小鼠提尾倒立并使其前肢置于桌面30s；

所述神经功能缺损评分的评分标准如下：

针对步骤(1)：身体对称性正常，无转圈现象，步态正常，触须后双侧反应对称的小鼠评分为0；身体轻微不对称，向一侧偏斜活动，一侧肢体僵硬不灵活，触须后轻微不对称的小鼠评分为1；身体中度不对称，偶尔向一侧转圈，一侧肢体跛行，触须后显著不对称的小鼠评分为2；身体显著不对称，一直向一侧转圈，肢体颤抖滑步，触须后同侧肢体反应消失，对侧反应减弱的小鼠评分为3；身体极其不对称，绕轴旋转、摇摆或无活动，静止不走，触须后双侧肢体感觉迟钝的小鼠评分为4；

针对步骤(2)：正常攀爬的小鼠评分为0；爬行吃力，肢体无力的小鼠评分为1；静止于斜面，不能上下活动的小鼠评分为2；缓缓滑下斜面的小鼠评分为3；无阻力迅速滑下的小鼠评分为4；

针对步骤(3)：表现正常的小鼠评分为0；轻微不对称的小鼠评分为1；明显不对称的小鼠评分为2；显著不对称的小鼠评分为3；显著不对称，且前肢或肢体无活动的小鼠评分为4；

针对步骤(4)：表现正常的小鼠评分为0；倾向于转向一侧的小鼠评分为1；向一侧转圈的小鼠评分为2；迟缓地向一侧转圈的小鼠评分为3；肢体无法活动的小鼠评分为4；

所述神经功能缺损评分共计28分，评分＞0为造模成功的小鼠。