[发明专利]一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法

说明书

本发明公开了一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，所述方法步骤如下：首先在小鼠的左心室穿刺取血，然后通过擦拭清理覆盖颅骨的软组织暴露颅骨术野，确定颅骨表面进针点后进行钻孔，再通过脑立体定位仪于钻孔处注射自体血，完成注射后，用骨蜡封住钻孔，消毒切口，缝合皮肤，即可。本发明采取左心室穿刺取动脉血，能在提取足量动脉血的前提下不降低小鼠存活率，通过小鼠脑定位仪精准地将自体动脉血回注入脑内基底节区尾壳核，形成稳定的血肿，为后续的实验提供保障，利于实验对照研究，且与临床上高血压患者病理变化和疾病转归极为相似，对脑出血后的疾病转归及治疗方案具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法。

背景技术

脑实质内出血是第二大常见卒中类型，具有高发病率、高死亡率和高致残率的特点，在我国约占全部脑卒中的20％～30％。高血压性脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)常发生在基底核的壳核及内囊区，约占ICH的70％，壳核出血常侵入内囊，常有病灶对侧偏瘫、偏身感觉缺失和同向性偏盲。脑出血后会引起脑水肿、血脑屏障完整性破坏、肢体感觉运动障碍和神经功能缺损。因此研究脑出血后的疾病转归及治疗方案具有重要意义，而建立有效、稳定的动物模型对于后续的研究是至关重要的第一步。

目前文献中报道主要有两种脑出血造模方法：胶原酶诱导脑出血模型和颅内自体血注入建立脑出血模型。其中胶原酶诱导脑出血模型是通过立体定位仪将胶原酶注射到小鼠右侧基底区，建立了脑出血模型。细菌胶原酶是一种蛋白酶，它溶解大脑毛细血管周围的细胞外基质并使其变弱，导致血管破裂和随后的血液外溢。但血肿体积不好控制，呈弥散性出血，不利于实验对照研究。且较高的死亡率限制了该模型的应用。另外胶原酶本身具有神经毒性，且会放大炎症反应，影响模型的建立，不能很好的模拟人类脑出血的病理变化和疾病转归。另一种颅内自体血注入脑出血模型，该方法是从鼠自体抽血后利用脑定位仪注入基底节区，文献中有报道从鼠尾静脉、眶周取血，但抽取的血液为静脉血，而高血压脑出血形成血肿的是动脉血，因此该方法不能很好地模拟临床上高血压脑出血。也有用剪尾法取血，将鼠尾端剪断取血，但该方法取得动静脉混合血，也非单纯动脉血。另外有文献报道从鼠尾动脉穿刺取血，该方法适用于大鼠，而小鼠尾动脉位于腹侧面深部，非常细，穿刺很困难，即使穿刺成功，取血量也有限，不能很好的满足实验需求。

综上所述，现有造模技术存在如下缺点和不足之处：(1)无法在小鼠体内找到最佳的穿刺部位和穿刺通道，从小鼠体内抽取足量的动脉血，以供实验所需。(2)穿刺取血后无法保证小鼠的存活率。(3)无法形成稳定的血肿，从而不能为后续的实验提供保障，不利于实验对照研究，不能很好的模拟人类脑出血的病理变化和疾病转归。因此探索一种新的优化的脑出血造模方法具有重要的意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，能在提取足量动脉血的前提下不降低小鼠存活率，且能形成稳定的血肿，为后续的实验提供保障，利于实验对照研究。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种小鼠高血压脑出血模型的造模方法，包括以下步骤：

步骤1)左心室穿刺取血：小鼠经异氟烷气体诱导麻醉，将小鼠仰卧位放置并将其四肢固定，使小鼠胸部、上腹部充分暴露；对小鼠进行胸部、上腹部大范围消毒，然后在其胸骨剑突与肋骨夹角处，倾斜10°～20°对准其心尖部穿刺抽血，将动脉血迅速转移备用；

步骤2)暴露颅骨术野：用手术刀在小鼠的头皮上做一个1cm长的中线切口，擦拭清理覆盖颅骨的软组织，以暴露垂直交点，即冠状和矢状缝交合点；

步骤3)确定颅骨表面进针点：将微量进样器安装到注射泵上，并将针头立体定向到冠状和矢状缝交合点上并调零；接下来，调整立体定向操作臂，将针放置在冠状和矢状缝交合点前0.2mm和右侧旁开2mm的位置；在此坐标使用变速钻在小鼠的颅骨上钻孔；