[发明专利]一种从发酵液中分离提取胞苷的方法

说明书

本发明公开了一种从发酵液中分离提取胞苷的方法，将含有胞苷的液体经阳离子交换树脂吸附洗脱，所得洗脱液浓缩结晶，即得胞苷晶体；其中，所述阳离子交换树脂为NH‑1树脂经硫酸银和/或硫酸改性所得。本发明中使用的阳离子交换柱为改性后的NH‑1树脂，其胞苷吸附量达到0.3g/g，减少了树脂用量，间接节省了酸碱用量和操作时间。

技术领域

本发明属于生化分离技术领域，具体涉及一种从发酵液中分离提取胞苷的方法。

背景技术

胞苷是嘧啶核苷，是胞磷胆碱的中间体，同时又是很多抗病毒、抗肿瘤、抗艾滋病等药物的中间体。胞苷广泛应用在食品、保健品、化妆品和医药等诸多行业。胞苷尤其是当代医学上很重要的药物合成中间体，随着其在应用范围上的不断扩大，对胞苷的需求也越来越大，自然对胞苷的制备研究也越来越深入。目前迫切需要开发廉价的可规模化应用的胞嘧啶核苷生产分离纯化工艺。

目前国内外，关于胞苷的生产，主要有化学合成法、酶法合成法、微生物发酵合成法。其中以微生物发酵合成法为主，关于如何选育高效、高产的微生物菌株的方法报道有很多，但是对于胞苷规模化分离纯化工艺的研究报道却较少。因此，本发明提供了一种从发酵液中分离提取胞苷的方法。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种分离提取胞苷的方法。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种分离提取胞苷的方法，将含有胞苷的液体经阳离子交换树脂吸附洗脱，所得洗脱液浓缩结晶，即得胞苷晶体。

其中，所述阳离子交换树脂为NH-1树脂经硫酸银和/或硫酸改性所得。

其中，所述阳离子交换树脂的吸附量为0.2-0.4g/g；优选地，所述阳离子交换树脂的吸附量为0.3g/g。

其中，所述硫酸银的用量为NH-1树脂质量的2％-8％；优选地，硫酸银的用量为NH-1树脂质量的4％-6％；优选地，硫酸银的用量为NH-1树脂质量的5％。

其中，所述硫酸的用量为树脂体积的10-20倍。

其中，改性过程中的溶剂为二氯乙烷和/或三氯乙烷。

其中，所述NH-1树脂与溶剂的体积比为1：(6-20)。

其中，将NH-1树脂与溶剂混合，于50-70℃下保持0.5-2h；加入硫酸银和/或硫酸，于70-90℃下保持2-4h，再于90-100℃下保持2-3h，过滤、洗涤，即得。

其中，所述洗涤为洗涤至中性。

其中，所述洗涤为用甲醇、乙醇和丙酮中的任意一种或几种有机溶剂洗涤

其中，经上述方法改性后静态吸附实验表明，树脂的吸附量由原来的0.09g/g提升至0.3g/g。

优选地，所述分离提取胞苷的方法包括如下步骤：

(1)胞苷发酵液经陶瓷膜过滤，去除固体杂质，得到第一透过液；

(2)步骤(1)所得第一透过液经阳离子交换树脂吸附，水和/或氨水洗杂、氨水洗脱，在该过程中用HPLC连续检测，检测到胞苷流出时，直接切换为胞苷洗脱，得到洗脱液；

(3)步骤(2)所得洗脱液同步经纳滤膜纳滤脱色，得到第二透过液；

(4)步骤(3)所得第二透过液经纳滤膜浓缩、真空蒸发浓缩，所得浓缩液调节pH，加入少量晶种作为诱导剂，搅拌降温析晶、过滤、洗涤、干燥，得到胞苷晶体。

步骤(1)中，胞苷来源于微生物发酵液，通过系统代谢工程改造所得的尿苷高产菌株大肠杆菌在50L发酵罐中，胞苷的初始产量在30-60g/L。此发酵液中，存在着大量的菌体、培养基与色素及其他杂质，分离难度较大。