[发明专利]一种低免疫原性鱼皮胶原蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种低免疫原性鱼皮胶原蛋白的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

（1）鱼皮前处理：将巴沙鱼皮去除残肉和结缔组织，剪成小块，用纯水清洗、沥干；

（2）鱼皮中杂蛋白、脂肪及部分内毒素的脱除：向沥干的巴沙鱼皮加入过氧化氢-氢氧化钠溶液处理2 ~ 6h，巴沙鱼皮与过氧化氢-氢氧化钠溶液的料液比w/v为1:20-1:30；用氯化钠溶液洗净过氧化氢后，加入氢氧化钠溶液搅拌处理3 ~ 5h后，用纯水将巴沙鱼皮洗至中性；所述过氧化氢-氢氧化钠溶液中过氧化氢的质量浓度为1% ~ 3%，氢氧化钠的摩尔浓度为0.1 ~ 0.2M；

（3）鱼皮胶原蛋白的粗提及端肽的去除：向步骤（2）中获得的巴沙鱼皮中加入乙酸溶液和酸性蛋白酶搅拌48 ~ 72h，巴沙鱼皮与乙酸溶液的料液比w/v为1:40 ~ 1:60；离心取上清液，得到去端肽的胶原蛋白粗提液；所述酸性蛋白酶的加酶量为200 ~ 600U/g；

（4）胶原蛋白的精制及干燥：将氯化钠粉末加入到胶原蛋白粗提液中进行盐析，离心得到胶原蛋白沉淀；将所述胶原蛋白沉淀复溶于乙酸溶液，用弱碱溶液透析至透析外液pH≥8灭酶后，先后用乙酸溶液和超纯水透析，得到精制的胶原蛋白溶液，冷冻干燥后得到冻干的胶原蛋白；

（5）内毒素灭活：将步骤（4）中冻干的胶原蛋白进行辐照处理，灭活细菌及内毒素；获得所述低免疫原性鱼皮胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法的所有步骤在2 ~ 8℃下进行，纯水、过氧化氢-氢氧化钠溶液、氢氧化钠溶液、氯化钠溶液、乙酸溶液、弱碱溶液均在2 ~ 8℃预冷。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中氯化钠溶液的质量浓度为0.7 ~ 1.0%。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中乙酸溶液浓度为0.3 ~0.5M。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸性蛋白酶为胃蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中弱碱溶液为摩尔浓度0.01 ~ 0.05M的磷酸氢二钠溶液。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）的辐照处理采用 60 Co辐照，辐照剂量为12-20k Gy。

8.根据权利要求1所述的制备方法制得的低免疫原性鱼皮胶原蛋白。