[发明专利]一种酶法制备卵磷脂型n-3PUFA的方法

说明书

本发明公开了一种酶法制备卵磷脂型n‑3PUFA的方法，属于酶的分离与应用技术领域。在氯化胆碱‑甘油磷脂酰胆碱组成的低共熔体系中，甘油磷脂酰胆碱既作溶剂又作底物，脂肪酶催化甘油磷脂酰胆碱与n‑3PUFA进行酯化反应，不仅可显著改善底物的传质，而且可将副产物吸收，解除产物抑制，大幅提升产物中卵磷脂含量和n‑3PUFA结合率。与传统的在无溶剂体系、无溶剂抽真空体系和有机溶剂体系下制备卵磷脂型n‑3PUFA相比，在该体系下制备卵磷脂型n‑3PUFA不仅安全、绿色环保，而且产物中卵磷脂含量大幅提升、n‑3PUFA结合率高；更为重要的是固定化脂肪酶可反复多利用。该方法具有良好的社会、生态和经济效益。

技术领域

本发明属于油脂加工技术领域，具体涉及一种酶法制备卵磷脂型n-3PUFA的方法。

背景技术

PUFA(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)是指含有两个或两个以上双键且碳链长度为18～22的直链脂肪酸，通常分为n-3和n-6PUFA。与n-6脂肪酸相比，n-3PUFA因其强大的健康益处而引起了人们的广泛关注。如作为大脑和突触膜的结构成分、对心脏及心血管健康的支持作用、改善新生儿的视觉和认知、减少脂肪积累、抑制炎症通路及对神经退行性疾病和脑老化的神经保护作用等。n-3PUFA通常以游离脂肪酸、脂肪酸乙酯、甘油三酯和磷脂等形式存在，相比于其它几种存在形式，n-3PUFA以磷脂形式存在时，具有更高的氧化稳定性且更容易通过血脑屏障进入大脑。由于天然来源的磷脂型n-3PUFA的来源较少(如磷虾油、蛋黄中)，因此目前卵磷脂型n-3PUFA的制备研究引起了广泛关注。

由于n-3PUFA易氧化，目前通常采用反应条件温和、催化特异性高及安全环保的生物酶法来制备卵磷脂型n-3PUFA。酶法酸解、酶法转酯化和酶法酯化是制备卵磷脂型n-3PUFA的常用方法。酶法酸解具有反应速率快的优点，但反应过程中卵磷脂易水解、n-3PUFA结合率低、n-3PUFA易氧化且产品颜色较深，最终产物中卵磷脂的含量通常低于20％且n-3PUFA结合率低于60％(Food Chem.,2014,157:132-140)；酶法转酯化反应速率较酶法酸解慢，反应过程中n-3PUFA不易氧化且产品色泽较浅，但仍存在卵磷脂水解严重、产物中卵磷脂含量低及n-3PUFA结合率低等问题(Catal.Commun.,2016,75:60-64)；酶法酯化具有n-3PUFA不易氧化、产品色泽浅及n-3PUFA结合率高(90％)等优点，但反应传质慢、需要在较高的真空度(400Pa)下进行且产物中卵磷脂含量低(5％)(Food Chem.,2017,226:165-170)。总之，目前酶法制备卵磷脂型n-3PUFA难以同时兼顾高卵磷脂含量和高n-3PUFA结合率。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种酶法制备卵磷脂型n-3PUFA的方法，产物中卵磷脂含量和n-3PUFA结合率大幅提升，且固定化脂肪酶可反复利用，具有良好的经济、生态效益和工业应用前景。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种酶法制备卵磷脂型n-3PUFA的方法，包括以下步骤：包括以下步骤：

步骤1：在氯化胆碱和甘油磷脂酰胆碱组成的低共熔体系中，甘油磷脂酰胆碱同时作为溶剂和底物；采用脂肪酶催化甘油磷脂胆碱与n-3PUFA进行酯化反应，反应结束后，离心，收集反应产物和脂肪酶；

步骤2：脂肪酶进行下一批次反应；去除反应产物中未反应的甘油磷脂酰胆碱、n-3PUFA和生成的溶血磷脂后得到卵磷脂型n-3PUFA。

优选地，步骤1中，氯化胆碱与甘油磷脂酰胆碱的摩尔比为1:1～3。

优选地，步骤1中，n-3PUFA为富含α-亚麻酸的植物油脂、海洋来源的富含EPA、DHA或DPA的动植物油脂或微生物发酵产生的油脂。

优选地，步骤1中，甘油磷脂酰胆碱与n-3PUFA的摩尔比为1:10～40。