[发明专利]一种生淀粉葡糖淀粉酶活力的测定方法

说明书

本发明公开了一种生淀粉葡糖淀粉酶活力的测定方法，属于检验测定技术领域。包括以下具体步骤：称取150mg生玉米淀粉于15ml试管中，65℃水浴预热2mi n，加0.2ml用缓冲液稀释的酶溶液，混合，65℃反应10mi n，加3ml DNS试剂，沸水浴煮10mi n，自来水冷却至室温，定容至15ml，3000r/mi n离心5mi n，取上清，用1cm光径比色杯，零时反应液为空白，于550nm波长测光吸收值，用葡萄糖标准曲线斜率值(K值)计算酶活力。本发明反应体系小、设备简单，反应时间短，测定结果准确，测定过程稳定，便于推广使用。

技术领域

本发明属于检验测定技术领域，具体为一种生淀粉葡糖淀粉酶活力的测定方法。

背景技术

发现生淀粉葡糖淀粉酶后，人们将葡糖淀粉酶分为两种类型：普通葡糖淀粉酶(即传统葡糖淀粉酶)和生淀粉葡糖淀粉酶(即新型葡糖淀粉酶)。生淀粉葡糖淀粉酶有别于普通葡糖淀粉酶的，特点是水解未经蒸煮糊化的生淀粉生成葡萄糖。生淀粉葡糖淀粉酶活力测定，目前国内外没有统一方法。由于生淀粉底物的水不溶性，多数实验室用大反应器(三角瓶)采用大体积(25-50ml)反应液深层振荡测定方法(Yang et al.2017)。底物浓度2％-5％，远不能满足酶活力测定底物需要充分过量的通常要求。测定用时间长达1-2h，并且测得酶活力低，反映不出真实酶活力。振荡反应方法，设备振荡方式和振幅大小不同，致使不同实验室之间不便进行比较。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生淀粉葡糖淀粉酶活力的测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明采用的技术方案如下：

一种生淀粉葡糖淀粉酶活力的测定方法，包括以下具体步骤：

(1)试剂选取

选取酶活力为3000u/ml的生淀粉葡糖淀粉酶液体制剂为试验酶溶液，选取含水量为7％的白色粉末状生玉米淀粉，选取3,5-二硝基水杨酸(DNS)为显示试剂，选取浓度为0.1mol/L、pH6.0的十二水合磷酸氢二钠-一水合柠檬酸为缓冲液；

(2)采用分光光度计比色法测定

①称取150mg步骤(1)中的生玉米淀粉置于15ml试管中，65℃水浴预热2min；

②向步骤①预热后的试管中加入0.2ml通过缓冲液稀释的酶溶液，摇匀，65℃水浴反应10min；

③向步骤②所得溶液中加入3ml 3,5-二硝基水杨酸显示试剂，在沸水浴煮10min，取出后用自来水冷却至室温，用蒸馏水定容至15ml；

④将步骤③所得溶液进行3000r/min离心5min，取上清液；

⑤将步骤④所得上清液用1cm光径比色杯于550nm波长测光吸收值，零时反应液为空白；

⑥用葡萄糖标准曲线斜率值(K值)计算酶活力。

在上述条件下，每小时水解生玉米淀粉产生1mg葡萄糖所需酶量定义为一个酶活力单位(u)，以u/ml表示。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明是一种简单、快速和易于控制的生淀粉葡糖淀粉酶活力测定新方法。以酶活力测定反应体系酶量、底物量和液相体积量三因素的恰当比例，在15ml反应器(试管)中装150mg生玉米淀粉和0.2ml含酶反应液，构成反应体系。反应液恰好以浅层浸没底物，满足酶活力测定底物需要充分过量的通常要求，酶与底物充分结合，快速高效作用，以致在静置反应10min短的时间完成酶活力测定反应。综上，本发明反应体系小、设备简单，反应时间短，测定结果准确，测定过程稳定，便于推广使用。

附图说明

图1为本发明试验5的酶反应时间过程曲线图。

具体实施方式