[发明专利]一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及方法，试剂盒包括抗原修复液、非特异性蛋白阻断剂、一抗、二抗、抗体稀释液、TSA染料、缓冲液、DAPI工作液、封片剂、加固液、脱蜡剂、水化剂、灭菌去离子水。本发明针对uNK细胞亚群的标记物染色，将uNK的亚群特异性标记出来，能够更准确、更深入地分析子宫内膜组织上发挥不同功能的NK亚群的状态变化，能够丰富我们从单个组织切片上获得的信息。另外，本发明采用了酪酰胺信号放大技术，该技术允许同一样本中使用同一种属来源的不同一抗进行多标记复合染色，同时其极强的灵敏度能够检测出微量的目的抗原，能够显著的降低抗体的用量，节约成本。

技术领域

本发明涉及医学和生物学检测领域，具体涉及一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及方法。

背景技术

子宫作为妊娠发生的场所，需确保不会对胚胎这一半同种异体移植物产生免疫排斥反应，而这有赖于主要由子宫内膜免疫细胞维持着的免疫耐受环境。子宫内膜免疫细胞包括自然杀伤(uNK)细胞、T细胞、巨噬细胞和树突状细胞等。其中，uNK细胞是子宫内膜中数量最多的一群免疫细胞，特别是在子宫内膜的分泌中期，uNK细胞数量急剧上升，在孕早期的母胎界面更是占淋巴细胞总数的70％。同时，uNK细胞能够表达KIR等受体，可与绒毛滋养层细胞表面的非经典MHC-I类分子结合，识别胚胎并为胚胎植入提供有利条件，比如降低杀伤毒性，减少滋养层细胞的凋亡。uNK细胞在时间和空间上的分布特性，意味着它们对子宫内膜容受性，即子宫接受胚胎的能力有着重要影响。

此外，uNK细胞在胚胎生长发育、婴儿出生体重方面也起着重要作用。uNK细胞能够分泌血管内皮生长因子、多效生长因子、骨甘氨酸等分子，其中血管内皮生长因子有利于胚胎种植位点的血管生成以及促进螺旋动脉血管重铸，有利于胚胎滋养层细胞的侵袭；多效生长因子参与到了血管生成的正常或者病理过程，大脑发育期间神经轴突生长以及骨和软骨的发育和再生过程；骨甘氨酸则在心脏发育、调节皮肤和眼睛胶原纤维厚度方面有着重要作用。

目前，uNK细胞与某些妊娠相关疾病，比如流产、妊娠期高血压疾病、胎儿宫内发育迟缓等疾病发病机制的关系尚未完全阐明，深入探究uNK细胞的作用机制，有利于人们了解妊娠相关疾病的发生过程，为辅助生殖乃至自然妊娠过程中有效规避不良妊娠风险、提高妊娠成功率奠定基础。

uNK细胞功能的多样性源自于NK细胞本身是一种由不同亚群组成的异质性细胞群，不同的亚群其生物功能、表面受体种类和丰度存在差异。按照生物功能不同，NK细胞可分为耐受性NK(表面受体以抑制性受体为主)、毒性NK(表面受体以活化性受体为主)以及调节性NK(表面受体以活化性受体为主，且靶细胞高表达炎性因子)三类亚群。从表型上来看，耐受性NK主要是CD56^brightCD16^-、CD27^-CD11b^-NK细胞，毒性NK主要是CD56dimCD16⁺、CD27^-CD11b⁺NK细胞，调节性NK主要是CD56^brightCD16^-、CD27⁺CD11b^+/-NK细胞。uNK各亚群可以通过各自特定的受体与滋养层细胞或者其他内膜免疫细胞等表面对应的配体相互作用，使得不同亚群能够展现出不同的功能。例如CD56^brightCD16^-uNK细胞，可以促进胚胎向子宫内膜迁移以及子宫内膜的血管新生，抑制辅助T细胞17(Th 17)活性，促进胚胎发育等；而CD56dimCD16⁺、CD27^-CD11b⁺uNK细胞，主要分泌毒性颗粒起细胞杀伤作用，当对滋养层细胞的杀伤作用过强时可导致妊娠失败。因此，我们对uNK在子宫内膜上的分布以及状态进行分析时，需要考虑到uNK的异质性，这样才能获得uNK更全面的信息，为我们了解uNK细胞的作用机制提供更详细更精准的参考信息。