[发明专利]一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种评估子宫内膜容受性的试剂盒，其特征在于，包括抗原修复液、非特异性蛋白阻断剂、一抗、二抗、抗体稀释液、TSA染料、缓冲液、DAPI工作液、封片剂、加固液、脱蜡剂、水化剂、灭菌去离子水。

2.根据权利要求1所述一种评估子宫内膜容受性的试剂盒，其特征在于，

所述抗原修复液包括Tris/EDTA；

所述非特异性蛋白阻断剂包括牛血清白蛋白；

所述一抗包括抗人自然杀伤细胞表面分子CD56的抗体、抗人白细胞表面分子CD45的抗体、抗人自然杀伤细胞亚型表面分子CD27的抗体、抗人自然杀伤细胞亚型表面分子CD11B的抗体、抗人自然杀伤细胞亚型表面分子CD16的抗体和抗人自然杀伤细胞亚型表面分子CD49α的抗体；

所述二抗包括辣根过氧化物酶标记的IgG抗体；

所述抗体稀释液包括IHC抗体稀释液；

所述TSA染料包括多靶点免疫荧光染色试剂盒，所述多靶点免疫荧光染色试剂盒包括荧光染料PPD480、荧光染料PPD520、荧光染料PPD570、荧光染料PPD650和信号放大液；

所述缓冲液包括1X TBST缓冲液；

所述DAPI工作液包括去离子水溶解的DAPI粉末；

所述封片剂包括水溶性抗荧光淬灭封片剂；

所述加固液包括10％中性福尔马林；

所述脱蜡剂包括二甲苯；

所述水化剂包括梯度浓度100％、95％、75％的乙醇。

3.一种评估子宫内膜容受性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)试剂准备：配置如权利要求2所述的评估子宫内膜容受性的试剂盒中的各个试剂；

(2)脱蜡水化：将带有标本的玻片依次放入三份二甲苯中，各浸泡5分钟完成脱蜡；然后再依次放入两份100％乙醇中，各浸泡5分钟，再放入95％乙醇中，浸泡3分钟，最后放入75％乙醇中，浸泡2分钟，使用灭菌去离子水洗3次，每次各1分钟，完成水化；

(3)加固样本：将步骤(2)所得玻片放入10％中性福尔马林浸泡10分钟，使用灭菌去离子水洗3次，每次各1分钟，完成加固；

(4)第一次抗原修复：往修复杯中倒入抗原修复液，微波炉内高火煮沸，放入待修复玻片低火10分钟，取出自然冷却至室温；

(5)血清封闭：将修复后的玻片使用灭菌去离子水洗片1次，1X TBST缓冲液冲洗1次，甩去多余的水分，用组化笔圈画出组织，滴加非特异性蛋白阻断剂，室温保湿振荡孵育10分钟；

(6)一抗孵育：弃去封闭液，滴加一抗中的其中一种抗体用抗体稀释液稀释好的一抗工作液，室温保湿振荡孵育30min，1X TBST缓冲液冲洗3次，每次2分钟；

(7)二抗孵育：弃除洗液，滴加二抗工作液，室温保湿震荡孵育10分钟，1X TBST缓冲液冲洗3次，每次2分钟；

(8)TSA孵育染色：弃除洗液，滴加TSA染料中与一抗的抗体对应的荧光染料工作液，室温保湿震荡孵育10分钟，1X TBST缓冲液冲洗2分钟；

(9)第二次抗原修复：往修复杯中倒入抗原修复液，微波炉内高火煮沸，放入孵育后待修复玻片低火10分钟，取出自然冷却至室温；

(10)重复步骤(5)-(9)，进行下一轮抗体染色，直至一抗中一组抗体组的所有染色完成；

(11)封片：弃除洗液，滴加DAPI工作液，室温保湿孵育10分钟，1XTBST缓冲液冲洗2分钟，待组织微干后，滴加水溶性抗荧光淬灭封片剂封片,用无色指甲油固定盖玻片；

(12)对多标记染色结果进行处理和分析：使用成像显微镜采集光谱图像，利用病例图片分析软件对图像进行识别和分析，在同一组织切片上实现子宫内膜自然杀伤细胞亚群的数量分析。