[发明专利]一种用于检测鉴定狄克氏属细菌的引物对、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测鉴定狄克氏属(Dickeya)细菌的引物对，其特征在于，包括正向引物和反向引物，正向引物为DicCSP-F1或DicCSP-F2，反向引物为DicCSP-R1或DicCSP-R2，其中，DicCSP-F2和DicCSP-R2为简并引物，

引物的核苷酸序列分别为：

正向引物DicCSP-F1：5’-GCGCTCAGATTGGTAACCGTTC-3’；

正向引物DicCSP-F2：5’-GCGCTCAGHTTGGTAACCGBTC-3’；

反向引物DicCSP-R1：5’-GAACCAAAAGTGAACAACTTGAAG-3’；

反向引物DicCSP-R2：5’-GAACCAAAAGTGAACAACTHGAAG-3’，其中，简并碱基H代表A、T或C，简并碱基B代表G、C或T。

2.如权利要求1所述引物对在检测鉴定狄克氏属细菌中的应用。

3.如权利要求1所述引物对在制备用于检测鉴定狄克氏属细菌的试剂盒中的应用。

4.一种用于检测鉴定狄克氏属细菌的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述引物对。

5.一种用于检测鉴定狄克氏属细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以样品的DNA作为扩增模板，使用权利要求1所述引物对进行扩增；

(2)检测扩增产物，若扩增出123bp或124bp的DNA片段，则样品含有狄克氏属细菌。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中样品为细菌、提取的细菌DNA或含有细菌/细菌DNA的粗提液。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，扩增时使用PCR扩增，然后用电泳检测PCR扩增产物；或者使用荧光定量PCR扩增并检测。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，PCR扩增时，扩增反应体系组成为：

100ng/μL的DNA模板：1μL；

10μM的正向引物DicCSP-F1：1μL，或10μM的正向引物DicCSP-F2：5μL；

10μM的反向引物DicCSP-R1：1μL，或10μM的反向引物DicCSP-R2：2μL；

2×Taq PCR Mix：12.5μL；

补无菌超纯水至25μL。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，PCR扩增时，扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸15s，35个循环；72℃延伸5min。