[发明专利]鉴定普通油茶与小果油茶的分子标记引物及其方法

权利要求书

1.鉴定普通油茶与小果油茶的分子标记引物，其特征在于：所述分子标记引物为以下序列的上下游引物：

上游引物：5’-CTCCCTCTCCTAACCAACCC-3’；

下游引物：5’-CCGCGGCTTATATAGGTGAA-3’。

2.采用权利要求1所述的分子标记引物鉴定普通油茶与小果油茶的方法，其特征在于：提取待测油茶叶片的基因组DNA作为模板，以所述分子标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测；若电泳结果出现609bp左右的条带则为普通油茶；若电泳结果出现227bp左右的条带则为小果油茶；

所述分子标记引物序列为：

上游引物：5’-CTCCCTCTCCTAACCAACCC-3’，

下游引物：5’-CCGCGGCTTATATAGGTGAA-3’。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)取待测油茶样本干叶片0.02g，加液氮彻底磨碎，使用植物基因组DNA提取试剂盒提取叶片的全基因组DNA；

(2)将所述步骤(1)提取的油茶基因组DNA稀释至2μM，以此为模板，以所述分子标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：

PCR反应体系总体积为20μl，组成如下：

PCR反应条件如下：

94℃预变性5min；94℃变性30s、57℃退火30s、72℃延伸90s，共40个循环；最后于72℃补平10min，终止温度为4℃；

(3)取上述PCR扩增产物2μl，与1μl0.25％溴酚兰缓冲液混匀，点样于1.0％的琼脂糖凝胶上，于1×TAB缓冲液中，100V电压下电泳30min，电泳结束后EB染色，于自动凝胶图像分析仪上照相，若电泳结果出现609bp左右的DNA条带则为普通油茶，若为227bp左右的DNA条带则为小果油茶。