[发明专利]一种热稳定核酸疫苗佐剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种热稳定核酸疫苗佐剂及其制备方法，属于疫苗佐剂制备技术领域，包括以下重量份原料：25.8‑31.2份油相、50‑60份水相、3.5‑4.6份改性微球和0.5‑1.1份无机填料，将无机填料和水相混合，频率40‑60kHz下超声分散后，加入油相和改性微球，继续超声处理20min，即得一种热稳定核酸疫苗佐剂，为乳液状，其内部物质吸附抗原后，具有凹凸不平的表面，抗原可以被吸附在其缝隙中，从而起到保护抗原的作用，使抗原在一定温度下可以对抗热损伤，保持生物活性，此外乳液中的小粒径颗粒会在油水界面产生较高的堆积效率，形成更加均一的颗粒膜，从而阻隔乳液之间的相互碰撞，保持核酸疫苗佐剂的状态稳定。

技术领域

本发明属于疫苗佐剂制备技术领域，具体地，涉及一种热稳定核酸疫苗佐剂及其制备方法。

背景技术

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入动物体细胞内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。

疫苗佐剂指与抗原同时或预先应用，能增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫应答类型的物质，包括无机佐剂(如氢氧化铝)、有机佐剂(如脂多糖、分枝杆菌)及合成佐剂穴如双链多聚肌苷酸，胞苷酸眼。

核酸疫苗是一类需要精心管理的敏感产品，将其置于适当的温度下进行保护和运输极为重要，热应激会降低疫苗的效价，或甚至会使其失去活性，无法激活免疫反应，存在巨大潜在风险，针对这一问题，提供一种热稳定核酸疫苗佐剂及其制备方法是目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种热稳定核酸疫苗佐剂及其制备方法，以解决上述背景技术中所提及的技术问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种热稳定核酸疫苗佐剂，包括以下重量份原料：25.8-31.2份油相、50-60份水相、3.5-4.6份改性微球和0.5-1.1份无机填料；

该热稳定核酸疫苗佐剂由以下步骤制成：

将无机填料和水相混合，频率40-60kHz下超声分散后，加入油相和改性微球，继续超声处理20min，即得一种热稳定核酸疫苗佐剂。

进一步地，所述改性微球由以下步骤制成：

步骤A1、将聚乙烯亚胺、乙腈和三乙胺加入圆底烧瓶中，摇荡均匀，先后加入六氯环三磷腈的乙腈溶液和壳聚糖的醋酸溶液，密封瓶口，在40℃下超声反应8h，超声功率180W，频率40Hz，然后于转速1000-1500r/min条件下离心20-30min，沉淀依次用丙酮和无水乙醇洗涤2次，最后于-45℃下干燥24h，得到复合微球，以聚乙烯亚胺、壳聚糖和六氯环三磷腈为底物，制备了交联型聚磷腈复合微球，具有较高的生物相容性和可降解性，并且N、P的六元杂环具有较高稳定性，具有一定的耐高温性能；

步骤A2、将DMF置于三口烧瓶中，冰浴条件下，向三口烧瓶中滴加氯磺酸，边滴加边搅拌，反应体系温度保持0-5℃，滴加结束后，室温下搅拌至澄清，得到处理剂，将氯磺酸和DMF混合得到处理剂；

步骤A3、将复合微球和无水乙醇加入三口烧瓶中，超声分散30min后，向三口烧瓶中滴加处理剂，滴加结束后，在微波辐射条件下反应1min，反应结束后于4℃冰箱中沉淀30min后取出，用蒸馏水洗涤并加入浓度2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为7-8，过滤，滤饼于蒸馏水中透析72h后，冷冻干燥至恒重，得到改性微球，利用复合微球表面的氨基与氯磺酸发生取代反应，使聚合物微球表面接枝磺酸基团，提高复合微球的水溶性。