[发明专利]一种检测松露子实体中α-雄烷醇含量的方法

说明书

本发明提供了一种检测松露子实体中α‑雄烷醇含量的方法，该方法包括如下步骤：(1)松露子实体的预处理；(2)超高效液相色谱检测；(3)化合物质谱信息获得；(4)超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用分析方法建立；(5)数据分析。本发明提供的检测松露子实体中α‑雄烷醇含量的方法，实现了对松露子实体中α‑雄烷醇的定性定量分析，为松露子实体的相关研究提供精确可靠的检测分析。

技术领域

本发明涉及食品药品分析领域，具体的说涉及一种检测松露子实体中α-雄烷醇含量的方法。

背景技术

松露又称无娘果、猪拱菌、块菌等，属子囊菌门西洋块菌科西洋块菌属，是一种共生于树下的稀有名贵食用菌，具有极高的经济价值，被誉为“世界三大珍肴”，是世界上最昂贵的食用菌。

5α-雄甾-16-烯-3α-醇(5α-androst-16-en-3α-ol)简称α-雄烷醇，是一类具有麝香气味的16-雄烯类甾体化合物，首次从猪睾丸中分离得到，广泛存在于人或动物组织、唾液、尿液、血浆和腋下汗液中。α-雄烷醇类似于人体内的性激素成分，是一种具有生物活性的类固醇化合物，能调节女性的情绪和月经时间，有发展成天然激素药物的潜力。由于其良好的气味和药理作用，雄烯醇类化合物已被开发为具有很高市场价值的香料，在抗抑郁药物开发方面也具有潜力。

1981年，Claus等人用薄层色谱法证实了黑松露鲜子实体中含有雄烯醇类成分。但由于薄层色谱分离能力和回收率较差，精密度和重现性也较差，导致该方法在问世后未被选择用于雄烯醇类分析。α-雄烷醇属于易挥发性物质，其在松露子实体中含量较低，检测前需经过提取浓缩，浓缩液中存在杂质的干扰。目前对于α-雄烷醇只有气相质谱一种检测方法，因受杂质的影响，检测结果的准确度不高，极大地限制了α-雄烷醇检测方法的推广。

因此，需要开发一种更为精确的检测α-雄烷醇的方法。

发明内容

本发明提供了一种检测松露子实体中α-雄烷醇含量的方法，该方法包括如下步骤：

(1)松露子实体的预处理：松露子实体样品加入有机溶剂进行提取，将提取液进行固相萃取，洗脱浓缩得到待测样品溶液；配制α-雄烷醇的标准品溶液；

(2)超高效液相色谱检测：对待测样品溶液和标准品溶液进行超高效液相色谱分离，以获得较好的分离度；

(3)化合物质谱信息获得：利用质谱优化软件(Agilent Optimizer)，对α-雄烷醇进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；

(4)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法的建立：在数据采集软件(Agilent MassHunter Data Acquisition)中，在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下，导入母离子、子离子对，建立α-雄烷醇的多反应监测(MRM)分析测定方法；同时，对不同浓度的标准品溶液和待测样品溶液进行上样测定；

(5)数据分析：运用定量分析软件(Agilent MassHunter QuantitativeAnalysis)，创建α-雄烷醇的标准曲线，对所建方法进行方法学验证，并对新鲜松露子实体待测样品溶液进行定量分析。

其中步骤(1)中松露子实体的预处理中：

提取所用的有机溶剂为乙醇；

提取方法为常温超声提取；

提取时间为30-90min，优选60min；料液比为1:1--1:10，优选1:2(重量g：体积mL)；

提取次数包括一次性提取或反复提取；优选的为一次性提取；

固相萃取时，固相小柱上样后选用40％浓度(体积比浓度)乙醇洗脱杂质，选用无水乙醇富集样品；选用的固相小柱填料为Oasis HLB，规格为3cc(60mg)；