[发明专利]一种检测松露子实体中α-雄烷醇含量的方法

权利要求书

1.一种检测松露子实体中α-雄烷醇含量的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)松露子实体的预处理：将松露子实体样品加入有机溶剂进行提取，将提取液进行固相萃取，洗脱浓缩得到待测样品溶液；配制α-雄烷醇的标准品溶液；

(2)超高效液相色谱检测：对待测样品溶液和标准品溶液进行超高效液相色谱分离；

(3)化合物质谱信息获得：利用质谱优化软件Agilent Optimizer，对α-雄烷醇进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；

(4)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法建立：在数据采集软件AgilentMassHunter Data Acquisition中，在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下，导入母离子、子离子对，建立α-雄烷醇的多反应监测MRM分析测定方法；同时，对不同浓度的标准品溶液和待测样品溶液进行上样测定；

(5)数据分析：运用定量分析软件Agilent MassHunter Quantitative Analysis，创建α-雄烷醇的标准曲线，对所建方法进行方法学验证，并对松露子实体待测样品溶液进行定量分析；

其中步骤（2）中超高效液相色谱分离的色谱条件为：选用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱，1.8μm，2.1×50mm，检测波长：210nm；柱温：35℃；上样量为2uL；流速：0.5mL/min；流动相：0.01%醋酸水A-甲醇B；洗脱程序：0min，20%A，80%B；5min，20%A，80%B；7min，0%A，100%B；8min，0%A，100%B；

其中步骤（4）中，以超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用为分析检测仪器，其中超高效液相条件为：色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18色谱柱，1.8μm，2.1×50mm；检测波长：210nm；柱温：35℃；上样量为2uL；流速：0.5mL/min；流动相：0.01%醋酸水A-甲醇B；洗脱程序：0min，20%A，80%B；5min，20%A，80%B；7min，0%A，100%B；8min，0%A，100%B；其中质谱条件为：大气压化学电离源APCI作为离子源，检测在正离子模式下进行，选用多反应监测MRM，毛细管电压：4500V，毛细管出口电压：380V；干燥气流速：14L/min，干燥气温度：200℃，电晕针电流：8μA，气化室温度：350℃，雾化气压力：30psi；

其中步骤（1）中松露子实体的预处理中：

提取所用的有机溶剂为乙醇；

提取方法为常温超声提取；

提取时间为60min；料液比为1:2，重量g：体积mL；

提取次数包括一次性提取或反复提取；

固相萃取时，固相小柱上样后选用40%浓度乙醇洗脱杂质，选用无水乙醇富集样品；选用的固相小柱填料为Oasis HLB，规格为3cc 60mg；

经固相萃取小柱萃取后，氮吹浓缩10倍，经0.2μm孔径的有机相微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液。

2.根据权利要求1所述的检测松露子实体中α-雄烷醇含量的方法，其中通过质谱优化软件Agilent Optimizer，获得步骤（3）中分析所需α-雄烷醇的保留时间、母离子、子离子对及碰撞能信息如下：

α-雄烷醇，保留时间：2.96min；母离子：257.2；定量离子：93.1，碰撞能：25；定性离子：77，碰撞能80。