[发明专利]一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法

说明书

本发明公开了一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，包括以下操作步骤：S1：对细胞毒性进行考察的步骤；S2：功能铁蛋白的表征测试步骤；S3：功能铁蛋白的性能考察步骤；S4：溶液中铁离子进、出铁蛋白的检测步骤；S5：细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测。通过上述方式，本发明通过简单的混合构建功能铁蛋白的方式，在对溶液中铁离子进/出铁蛋白检测的基础上，进一步将其用于细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测，从而为铁蛋白储存和释放铁的研究以及铁相关疾病的诊断和治疗提供新的方法和技术手段。

技术领域

本发明涉及细胞中功能铁蛋白检测方法，属于生物领域，特别是涉及一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法。

背景技术

铁蛋白作为机体内储存铁的重要蛋白，其储存或释放铁的行为与机体内铁含量的升高或降低密切相关，而机体内铁含量的异常与心血管疾病、帕金森病、癌症等疾病的发生、进展或预后密切相关。铁蛋白可通过储存和释放铁的方式，调控机体或细胞内铁含量的动态平衡，即在外源的可利用的铁不足时，其可将储存的铁释放供机体利用；当机体内铁过量时，其能吸收并储存铁，降低铁水平，从而使机体免于氧化损伤等。因此，检测铁蛋白储存和释放铁的行为对铁含量的变化以及铁相关疾病的发生、发展过程的评价具有重要意义。

铁的检测一直以来受到研究者的广泛关注，对其的检测方法也是多样的。其中分光光度法、火焰原子吸收法、比色法等分析方法已广泛应用，但由于需要复杂的前处理、对样品造成破坏或无法实现原位检测的问题，在应用方面受到了限制。荧光成像技术则可有效地解决上述问题，其具有高灵敏度、高时空分辨率、无损伤以及可原位实时检测等优点，能够从亚细胞或分子层面实现对细胞微结构的可视化研究。然而，目前基于荧光成像技术对细胞内铁的研究，往往关注的是如何实现细胞中铁含量的测定，而在细胞中原位检测铁蛋白储存/释放铁的相关研究鲜有报道，单纯的CDs可实现细胞中铁含量的测定，但无法实现细胞内铁蛋白储存和释放铁的检测。

鉴于此，本发明拟利用自组装方式将荧光碳点(carbon dots，CDs)和生物相容性好的脱铁铁蛋白(Apoferritin，APO)通过简单的混合构建功能铁蛋白(APO@CDs)。在对溶液中铁离子进/出铁蛋白检测的基础上，进一步将其用于细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测，从而为铁蛋白储存和释放铁的机理研究以及铁相关疾病的诊断和治疗提供新的方法和技术手段。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是如何提供一种通过简单的混合构建功能铁蛋白的方式，在对溶液中铁离子进/出铁蛋白检测的基础上，进一步将其用于细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测，从而为铁蛋白储存和释放铁的研究以及铁相关疾病的诊断和治疗提供新的方法和技术手段的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，所述检测方法包括以下操作步骤：

S1：对细胞毒性进行考察；

S2：功能铁蛋白的表征测试；

S3：功能铁蛋白的性能考察；

S4：溶液中铁离子进、出铁蛋白的检测；

S5：细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测。

其中，在一个较佳实施例中，在步骤S2中，利用自组装方式将碳点(CDs)、脱铁铁蛋白(APO)通过混合，构建功能铁蛋白。

在一个较佳实施例中，在步骤S2中，根据碳点(CDs)、脱铁铁蛋白(APO)、APO@CDs的数据绘制紫外可见吸收光谱和荧光光谱，且在紫外可见吸收光谱与荧光光谱中确认APO@CDs中是否包载有碳点(CDs)。

在一个较佳实施例中，在步骤S2中，采用Zeta电位分析仪对碳点(CDs)、APO@CDs进行Zeta电位测定，并根据纳米颗粒的Zeta电位的负值的大小，判定稳定性；