[发明专利]一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法

权利要求书

1.一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下操作步骤：

S1：对细胞毒性进行考察；

S2：功能铁蛋白的表征测试；

S3：功能铁蛋白的性能考察；

S4：溶液中铁离子进、出铁蛋白的检测；

S5：细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测。

2.根据权利要求1所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤S2中，利用自组装方式将碳点、脱铁铁蛋白通过混合，构建功能铁蛋白。

3.根据权利要求2所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤S2中，根据碳点、脱铁铁蛋白、APO@CDs的数据绘制紫外可见吸收光谱和荧光光谱，且在紫外可见吸收光谱与荧光光谱中确认APO@CDs中是否包载有碳点。

4.根据权利要求3所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤S2中，采用Zeta电位分析仪对碳点、APO@CDs进行Zeta电位测定，并根据纳米颗粒的Zeta电位的负值的大小，判定稳定性。

5.根据权利要求4所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤S2中，当纳米颗粒溶液体系的电位绝对值大于15mV，则判定形成了稳定的体系。

6.根据权利要求1所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤S4和步骤S5中，采用荧光显现的方式对溶液中铁离子进、出铁蛋白的检测进行检测，还包含有以下操作过程：

SS1：溶液中铁离子进铁蛋白的检测；

SS2：溶液中铁离子出铁蛋白的检测；

SS3：细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测。

7.根据权利要求6所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤SS1中，当铁离子进入铁蛋白内腔，并与空腔中对Fe³⁺有特异性响应的碳点反应实现Fe³⁺进铁蛋白的检测。

8.根据权利要求7所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，当Fe³⁺在浓度为5～120mol/L的范围内，APO@CDs的荧光强度与Fe³⁺的浓度呈现线性关系。

9.根据权利要求6所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤SS2中，测试APO@CDs与Fe³⁺的荧光比值，并根据荧光比值判定Fe³⁺是否进入了铁蛋白：

当荧光比值降低时，则判定Fe³⁺进入了铁蛋白；

当荧光比值增大，则判定螯合出进入铁蛋白的Fe³⁺，使Fe³⁺出铁蛋白。

10.根据权利要求1所述的用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，其特征在于，其中，在步骤SS3中，通过将APO@CDs孵育的细胞，APO@CDs和Fe³⁺共孵育的细胞以及APO@CDs、Fe³⁺和甲磺酸去铁胺共孵育的细胞在激光共聚焦显微镜下成像，从而检测细胞内铁蛋白储存和释放铁。