[发明专利]一种HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法

说明书

本发明提供一种HPLC‑MS‑MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，包括以下步骤：分别向校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测SD大鼠样品中加入10.0ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液稀释20倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用超纯水溶液稀释2倍即可进样分析。分别向空白基质和溶剂样中加入空白基质和超纯水，再分别用乙腈稀释20倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用超纯水溶液稀释2倍即可进样分析。将上述处理后的各个样品分别注入液相色谱质谱联用仪中，对北五加皮苷N以及甲苯磺丁脲成分进行定量检测。本发明对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法。

背景技术

生物样品分析随着质谱技术的发展，其应用日益广泛。但由于生物样品中的基质复杂，且药物浓度低。因此，需要获得更准确且稳定的测定方法。HPLC-MS-MS技术中，高效液相色谱是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在两相间的分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用差别使不同溶质进行分离。因此，亟待开发出一种采用HPLC-MS-MS技术，建立并验证SD大鼠血浆中北五加皮苷N浓度测定的液质联用方法，旨在获得更加准确且稳定性高的含量测定方法，从而便于科研以及工业化应用。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明的目的在于提供一种HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

本发明的目的通过以下技术方案得以实现：

本发明提供一种HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，包括以下步骤：

步骤一、样品制备：

制备校正标示样品：以北五加皮苷N为溶质，以乙腈水溶液为溶剂，配制北五加皮苷N不同梯度浓度的校正标示工作液；分别取各浓度校正标示工作液，用空白基质稀释，得到校正标示样品；

制备质控样品：以北五加皮苷N为溶质，以乙腈水溶液为溶剂，配制北五加皮苷N不同梯度浓度的质控工作液；分别取各浓度质控工作液，用空白基质稀释，得到质控样品；

步骤二、样品处理：

分别向校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测SD大鼠血浆中加入甲苯磺丁脲内标工作液稀释，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用超纯水溶液稀释；

分别向空白基质和溶剂样中加入乙腈稀释，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用超纯水溶液稀释；

步骤三、样品检测：

将上述步骤二中处理后的校正标示样品、质控样品、内标样品、待测SD大鼠血浆、空白基质和水样分别注入液相色谱质谱联用仪中，对北五加皮苷N以及甲苯磺丁脲成分进行定量检测，通过回归和数据处理获得SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量。

作为优选，所述步骤一中，制备校正标示样品和质控样品所采用的乙腈水溶液的体积浓度均为50％；采用空白基质稀释的倍数均为20倍。

作为优选，所述步骤一中，校正标示工作液中的北五加皮苷N的梯度浓度为20.0～20000ng/mL；质控工作液中的北五加皮苷N的梯度浓度为20.0～15000ng/mL。

作为优选，所述步骤二中，采用的甲苯磺丁脲内标工作液的浓度为10.0ng/mL；利用其对校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测SD大鼠血浆进行稀释的倍数为20倍；采用超纯水溶液稀释的倍数为2倍。

作为优选，所述步骤二中，向空白基质和溶剂样中加入乙腈稀释的倍数为20倍；采用超纯水溶液稀释的倍数为2倍。