[发明专利]一种HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法

权利要求书

1.一种HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其特征在于，包

括以下步骤：

步骤一、样品制备：

制备校正标示样品：称量一定量的北五加皮苷N，溶解于二甲基亚砜溶液中，得到1.00mg/mL北五加皮苷N储备液；取1.00mg/mL北五加皮苷N储备液，以50%乙腈水溶液为溶剂，配制北五加皮苷N20.0~20000ng/mL梯度浓度的校正标示工作液；分别取各浓度校正标示工作液，用空白基质稀释，得到校正标示样品；

制备质控样品：称量一定量的北五加皮苷N，溶解于二甲基亚砜溶液中，得到1.00mg/mL北五加皮苷N储备液；取1.00mg/mL北五加皮苷N储备液，以50%乙腈水溶液为溶剂，配制北五加皮苷N20.0~15000ng/mL梯度浓度的质控工作液；分别取各浓度质控工作液，用空白基质稀释，得到质控样品；

步骤二、样品处理：

分别向校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测SD大鼠血浆中加入甲苯磺丁脲内标工作液稀释，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用超纯水溶液稀释；

分别向空白基质和溶剂样中加入乙腈稀释，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用超纯水溶液稀释；

步骤三、样品检测：

将上述步骤二中处理后的校正标示样品、质控样品、内标样品、待测SD大鼠血浆、空白基质和溶剂样分别注入液相色谱质谱联用仪中，对北五加皮苷N以及甲苯磺丁脲成分进行定量检测，通过回归和数据处理获得SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量；

其中，按照下述液相色谱条件进行检测：

色谱柱：填料粒径为5μm，直径2.1mm，长度50mm的ACE 5C18色谱柱；

流动相：流动相为A和B的混合体系，A为甲酸乙酸铵水溶液，其中甲酸：1M乙酸铵：水 的体积比为0.1:0.2:100；B为甲酸乙酸铵甲醇乙腈溶液，其中甲酸：1M乙酸铵：甲醇：乙腈 的体积比为0.1:0.1:50:50；

洗脱梯度为：

0.01min，A的体积百分比为40％，B的体积百分比为60％；

0.90min，A的体积百分比为0％，B的体积百分比为100％；

1.60min，A的体积百分比为0％，B的体积百分比为100％；

1.61min，A的体积百分比为40％，B的体积百分比为60％；

2.50min，A的体积百分比为40％，B的体积百分比为60％。

2.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其特征在于，所述步骤一中，制备校正标示样品和质控样品所采用空白基质稀释的倍数均为20倍。

3.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其特征在于，所述步骤二中，采用的甲苯磺丁脲内标工作液的浓度为10.0ng/mL；利用其对校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测SD大鼠血浆进行稀释的倍数为20倍；采用超纯水溶液稀释的倍数为2倍；

向空白基质和溶剂样中加入乙腈稀释的倍数为20倍；采用超纯水溶液稀释的倍数为2倍。

4.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其特征在于，所述步骤一中，以北五加皮苷N为溶质进行配制样品采用的是含有白五加皮苷N的二甲基亚砜溶液；所述白五加皮苷N在二甲基亚砜溶液中的浓度为1.00mg/mL。

5.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述液相色谱的进样器清洗液为：弱洗采用50％甲醇水溶液，强洗采用甲醇、乙腈、异丙醇、水按照体积比1:1:1:1混合而成。

6.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定SD大鼠血浆中北五加皮苷N成分含量的方法，其特征在于，所述步骤三中，按照下述液相色谱条件进行检测：

流速：0.40mL/min；

柱温：40℃；

自动进样器温度：4℃；

进样量：10μL。