[发明专利]固定化酶凝胶亲和吸附柱制备方法及从河鲀中提取活性肽的方法

说明书

本发明公开了固定化酶凝胶亲和吸附柱制备方法及从河鲀中提取活性肽的方法，属于活性肽技术领域，包括以下步骤：a：制得ACE螯合配体溶液，b：除去残余HCl，c：将ACE螯合配体溶液与溴化氰活化琼脂糖4B填料混合，除去多余的ACE，d：轻柔振荡后过滤，e：过滤后，采用醋酸盐缓冲液和Tris‑HCl缓冲液交替清洗过滤3‑5次，得ACE固定化凝胶填料，将ACE固定化凝胶填料悬浮于硼酸盐缓冲液，装填入层析柱，即为固定化酶凝胶亲和吸附柱。制备的固定化酶凝胶亲和吸附柱用于活性肽的筛选具有筛选快速高效、操作简便易行的特点，可用于活性肽的快速规模化筛选，制备的活性肽具有ACE抑制活性和DPP‑Ⅳ抑制活性。

技术领域

本发明属于活性肽技术领域，尤其涉及一种固定化酶凝胶亲和吸附柱制备方法及从河鲀中提取活性肽的方法。

背景技术

随着社会的进步与发展，人们生活水平逐渐提高，饮食中脂肪与热量的比重逐渐加大，再加上运动量的减少，我国心血管疾病的发病率快速上升，其中高血压占主要地位。

河鲀为暖温带及热带近海底层鱼类，栖息于海洋的中、下层，有少数种类进入淡水江河中，当遇到外来危险时使整个身体呈球状浮上水面，同时皮肤上的小刺竖起，借以自卫。

血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽是经过蛋白水解后形成的小分子多肽，它具有显著的降血压作用，更有效的是它与其它普通降压药物比较发现，ACE抑制肽无毒副作用，并且对正常的血压无影响。ACE在血压调节中起重要作用，经碳端两个氨基酸(His-Leu)的切除，能够把原本无活性的血管紧张素Ⅰ转变为具有活性的血管紧张素Ⅱ，引起血管收缩，使血压上升；ACE还会使具有血管舒张功能的舒缓激肤失活，同样又引起血压上升的情形，ACE抑制肽能够阻断ACE引起的两种生化反应过程，起到降血压的作用。

现有制备活性肽需要对酶解后的肽组分进行吸附洗脱处理，其中，吸附柱起到至关重要的作用，尤其是其填料，影响着洗脱效率。

现有在从榛子、牦牛乳、贝肉、枸杞等食物中制备活性肽的技术，因此亟需一种以河鲀为原料制备活性肽的技术。

发明内容

本发明的目的在于提出一种固定化酶凝胶亲和吸附柱制备方法及从河鲀中提取活性肽的方法，制备的固定化酶凝胶亲和吸附柱用于活性肽的筛选具有筛选快速高效、操作简便易行的特点，可用于活性肽的快速规模化筛选，采用河鲀鱼皮作为原料，获得活性肽氨基酸序列，制备的活性肽具有ACE抑制活性和DPP-Ⅳ抑制活性，具有良好的降压降血糖效果。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供的固定化酶凝胶亲和吸附柱制备方法，包括以下步骤：a：将ACE溶解于硼酸盐缓冲液制得ACE螯合配体溶液,b：往溴化氰活化琼脂糖凝胶4B中加入稀盐酸进行溶胀，过滤后用硼酸盐缓冲液清洗、滤干，除去残余HCl，得溴化氰活化琼脂糖4B填料,c：将ACE螯合配体溶液与溴化氰活化琼脂糖4B填料混合，搅拌均匀后螯合过夜，螯合后，用4-6倍溴化氰活化琼脂糖4B填料体积的硼酸盐缓冲液进行清洗和过滤，除去多余的ACE,d：将滤干后的溴化氰活化琼脂糖4B填料与Tris-HCl缓冲液混匀，进行轻柔振荡后过滤,e：过滤后，采用醋酸盐缓冲液和Tris-HCl缓冲液交替清洗过滤3-5次，得ACE固定化凝胶填料，将ACE固定化凝胶填料悬浮于硼酸盐缓冲液，装填入层析柱，即为固定化酶凝胶亲和吸附柱。。

优选地，ACE的酶活力单位为4.5-5.5U/ml。