[发明专利]基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法

说明书

本发明公开了基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，属于NK细胞数量扩增技术领域，S1：原料准备：S2：实验进行：S3：扩增观察：S4：细胞检测：S5：结论对比。本发明基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，为细胞提供更充分的氧气交换，能够为细胞提供更大来源的养分，为细胞提供良好的对流环境，培养基中的溶质通过自然对流可自由移动到细胞，提高培养的便捷性，也增加细胞培养质量，可以进一步地探讨和优化扩增方案，从而获得高效高纯度的NK细胞，便于后期进行翻阅以及在实验的数据上进行研究，对下次研究进行铺垫，提高后期研究质量。

技术领域

本发明涉及到NK细胞数量扩增技术领域，特别涉及基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)在人体的先天免疫系统中起着重要的作用，早在70年代，科研人员就对它们进行了描述，但直到最近的15年，人们才逐渐了解NK细胞在帮助抗击癌症和其它疾病方面的复杂性和治疗潜力。

1、在现有的NK细胞数量扩增研究中，大多研究实验中，其使用器皿多为固定式，更换数量少，无法根据其变化进行转换，不方便对细胞进行观测；

2、在研究后，无法根据多种诱导因子的加入进行研究，不能确定不同因子导致的NK细胞具体作用。

发明内容

本发明的目的在于提供基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，为细胞提供更充分的氧气交换，能够为细胞提供更大来源的养分，为细胞提供良好的对流环境，培养基中的溶质通过自然对流可自由移动到细胞，不需要复杂的混合或灌注仪器，提高培养的便捷性，也增加细胞培养质量，为NK细胞体外扩增方案的选择提供了可靠的基础研究，在此基础之上，可以进一步地探讨和优化扩增方案，从而获得高效高纯度的NK细胞，便于后期进行翻阅以及在实验的数据上进行研究，对下次研究进行铺垫，提高后期研究质量，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，包括如下步骤：

S1：原料准备：自体或异体NK细胞用于移植，可从不同来源获得细胞，包括外周血单个核细胞、脐带血、骨髓、诱导多能干细胞和细胞系，取多组用于进行实验的培养器具；

S2：实验进行：体外扩增NK细胞，使用细胞因子进行扩增NK细胞并提高其活性，细胞因子介导NK细胞的增殖和活化，其细胞因子包括IL-2、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21和I型干扰素；

S3：扩增观察：将取出的原料放置在培养器具内加入诱导扩增因子进行混合后，并对培养器内的细胞进行持续性的观察的添加性实验；

S4：细胞检测：在扩增培育尾期，取培养器具内细胞到细胞皿内进行检测，将检测结果实时记录；

S5：结论对比：将多组实验记录信息进行整合，并对多组结果以及过程进行比较，将对比结果进行记录并存档。

进一步地，针对S1中，培养器具包括培养瓶、培养袋以及生物反应器，且培养瓶分为开放型培养瓶和封闭式培养瓶。

进一步地，针对S2中的实验进行包括如下步骤：

S201：取外周血单个核细胞、脐带血、骨髓、诱导多能干细胞和细胞系中的一种经病毒检测合格后，送入实验室中，取70ml血细胞，按常规的血浆及PBMC分离方法分离获得血浆和白细胞层；

S202：白细胞层经洗涤，计数为7.4*107，以1.5*106个/ml密度接种在培养器皿中，取多组检测用于检测的细胞体，分别放置在不同的培养器皿中进行扩增实验；