[发明专利]基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法

权利要求书

1.基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：原料准备：自体或异体NK细胞用于移植，可从不同来源获得细胞，包括外周血单个核细胞、脐带血、骨髓、诱导多能干细胞和细胞系，取多组用于进行实验的培养器具；

S2：实验进行：体外扩增NK细胞，使用细胞因子进行扩增NK细胞并提高其活性，细胞因子介导NK细胞的增殖和活化，其细胞因子包括IL-2、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21和I型干扰素；

S3：扩增观察：将取出的原料放置在培养器具内加入诱导扩增因子进行混合后，并对培养器内的细胞进行持续性的观察的添加性实验；

S4：细胞检测：在扩增培育尾期，取培养器具内细胞到细胞皿内进行检测，将检测结果实时记录；

S5：结论对比：将多组实验记录信息进行整合，并对多组结果以及过程进行比较，将对比结果进行记录并存档。

2.根据权利要求1所述的基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，其特征在于：针对S1中，培养器具包括培养瓶、培养袋以及生物反应器，且培养瓶分为开放型培养瓶和封闭式培养瓶。

3.根据权利要求1所述的基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，其特征在于：针对S2中的实验进行包括如下步骤：

S201：取外周血单个核细胞、脐带血、骨髓、诱导多能干细胞和细胞系中的一种经病毒检测合格后，送入实验室中，取70ml血细胞，按常规的血浆及PBMC分离方法分离获得血浆和白细胞层；

S202：白细胞层经洗涤，计数为7.4*107，以1.5*106个/ml密度接种在培养器皿中，取多组检测用于检测的细胞体，分别放置在不同的培养器皿中进行扩增实验；

S203：加入诱导培养基、因子及灭活血浆，放置在37℃，5％CO2的二氧化碳培养箱中培养，其中的诱导培养基内也包括有辅助细胞和生长失活的滋养细胞。

4.根据权利要求3所述的基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，其特征在于：针对S201中，血细胞为新鲜血液进行采集，脐血尽可能采集新鲜血液，分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是1.077±0.001的聚蔗糖-泛影葡胺分层液，离心后沉于管底，淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中，吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。

5.根据权利要求4所述的基于表面活化受体和抑制受体表达的NK细胞数量扩增方法，其特征在于：针对S201中，在分离过程中，要实时掌控离心器械的温度，并对离心的升降速进行设置。