[发明专利]一种CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体，其特征在于，所述CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体包括脂质纳米颗粒和离子液体；

所述的离子液体包括胆碱型离子液体和/或咪唑型离子液体；

所述胆碱型离子液体包括胆碱阳离子和阴离子，所述阴离子包括无机阴离子和/或有机阴离子；

所述咪唑型离子液体包括1-烷基-3-甲基咪唑阳离子和阴离子，所述阴离子包括无机阴离子和/或有机阴离子；

所述1-烷基-3-甲基咪唑阳离子中烷基为C1～C16的直连烷基或支链烷基；

所述胆碱型离子液体和咪唑型离子液体中的无机阴离子各自独立地包括硫酸根离子、碳酸根离子、碳酸氢根离子、卤素离子、磷酸氢根离子或磷酸二氢根离子中的任意一种或至少两种的组合；

所述的胆碱型离子液体和咪唑型离子液体中的有机阴离子各自独立地包括乳酸根离子、甲酸根离子、C1～C10烷基羧酸根离子、三氟甲磺酰亚胺离子、多库酯酸根离子、烟碱酸离子、水杨酸根或香叶酸根离子中的任意一种或至少两种的组合。

2.根据权利要求1所述的CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体，其特征在于，所述CRISPR-cas9基因编辑系统包括核糖核蛋白。

3.根据权利要求2所述的CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体，其特征在于，所述核糖核蛋白包括单向导RNA和Cas9蛋白。

4.根据权利要求1所述的CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体，其特征在于，所述脂质纳米颗粒含有胆固醇、离子化脂质、PEG-脂质和磷脂。

5.一种权利要求1-4任一项所述的CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

将脂质纳米颗粒和离子液体混合，即得到所述CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体。

6.一种基因编辑组合物，其特征在于，所述基因编辑组合物包括权利要求1-4任一项所述的CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体和CRISPR-cas9基因编辑系统。

7.根据权利要求6所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述CRISPR-cas9基因编辑系统包括核糖核蛋白。

8.根据权利要求7所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述核糖核蛋白包括单向导RNA和Cas9蛋白。

9.一种权利要求6所述的基因编辑组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

将权利要求1-4任一项所述的CRISPR-cas9基因编辑系统递送载体和CRISPR-cas9基因编辑系统混合，即得到所述基因编辑组合物。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括制备方法I、制备方法II、制备方法III或制备方法Ⅳ中的任意一种；

所述制备方法I包括：将离子液体溶液和CRISPR-cas9基因编辑系统溶液混合，加入脂质纳米颗粒溶液，进行孵育；

所述制备方法II包括：将离子液体溶液与脂质纳米颗粒溶液混合，加入CRISPR-cas9基因编辑系统溶液，进行孵育；

所述制备方法III包括：将脂质纳米颗粒溶液和CRISPR-cas9基因编辑系统溶液混合，加入离子液体溶液，进行孵育；

所述制备方法Ⅳ包括：将离子液体溶液与脂质纳米颗粒溶液混合，充分混匀，得到含有离子液体的脂质纳米颗粒溶液，将离子液体溶液与CRISPR-cas9基因编辑系统溶液混合，得到含有离子液体的CRISPR-cas9基因编辑系统溶液，将所述含有离子液体的脂质纳米颗粒溶液和含有离子液体的CRISPR-cas9基因编辑系统溶液混合，进行孵育。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法I、制备方法II、制备方法III和制备方法Ⅳ中孵育的时间各自独立地为5～30min。