[发明专利]分子印迹智能凝胶光栅及其制备方法与凝血酶检测方法

权利要求书

1.一种分子印迹智能凝胶光栅，其特征在于，该凝胶光栅由基底和基底上的相互平行的凝胶条组成，凝胶条之间的间隙为凝胶光栅的狭缝，所述凝胶条由凝血酶响应型分子印迹凝胶构成；

所述凝血酶响应型分子印迹凝胶是由含凝血酶印迹复合物的凝胶在洗脱掉凝胶网络中的凝血酶后形成的；所述凝血酶印迹复合物是由凝血酶特异性核酸适配体A1、凝血酶特异性核酸适配体A2与凝血酶的不同位点结合形成的，凝血酶特异性核酸适配体A1的核苷酸序列为5'-/5Acryd/GGT TGG TGT GGT TGG-3'，凝血酶特异性核酸适配体A2的核苷酸序列为5'-/5Acryd/AGA CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT-3'；

所述含凝血酶印迹复合物的凝胶是由N-异丙基丙烯酰胺、凝血酶印迹复合物与交联剂交联反应形成的，在交联反应过程中，N-异丙基丙烯酰胺的碳碳双键、凝血酶印迹复合物中的凝血酶特异性核酸适配体A1的5'端以及凝血酶特异性核酸适配体A2的5'端上的碳碳双键与交联剂上的碳碳双键发生加成反应形成凝胶网络；交联反应过程中，控制N-异丙基丙烯酰胺与交联剂的摩尔比为1:(0.01～0.05)，凝血酶印迹复合物与交联剂的摩尔比为1:(1000～5000)。

2.根据权利要求1所述分子印迹智能凝胶光栅，其特征在于，所述交联剂为四臂-聚乙二醇丙烯酰胺、八臂-聚乙二醇丙烯酰胺或二臂-聚乙二醇丙烯酰胺。

3.根据权利要求1所述分子印迹智能凝胶光栅，其特征在于，该凝胶光栅的周期与光栅高度之比为1:(0.01～0.1)。

4.根据权利要求1所述分子印迹智能凝胶光栅，其特征在于，所述基底为硅烷化处理的石英玻璃片，凝胶条通过共价键与基底结合。

5.权利要求1至4中任一权利要求所述分子印迹智能凝胶光栅的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制凝胶预聚液

将凝血酶特异性核酸适配体A2加入凝血酶溶液中，搅拌20～40min，然后加入凝血酶特异性核酸适配体A1，搅拌20～40min，得到含凝血酶印迹复合物的溶液；凝血酶特异性核酸适配体A1以及凝血酶特异性核酸适配体A2与凝血酶的摩尔比均为1:(0.02～1)；

向含凝血酶印迹复合物的溶液中加入N-异丙基丙烯酰胺、交联剂、引发剂以及加速剂，在冰浴条件下充分震荡溶解，得到凝胶预聚液；凝胶预聚液中，N-异丙基丙烯酰胺的浓度0.5～2.5mol/L，N-异丙基丙烯酰胺与交联剂的摩尔比为1:(0.01～0.05)，N-异丙基丙烯酰胺与引发剂的摩尔比为1:(0.005～0.05)，N-异丙基丙烯酰胺与加速剂的摩尔比为1:(0.02～0.2)，凝血酶印迹复合物与交联剂的摩尔比为1:(1000～5000)；

(2)制备含凝血酶的凝胶光栅

将凝胶预聚液滴加到基底上，将凝胶光栅模板压在凝胶预聚液上，在4～10℃的条件下反应4～12h，剥离凝胶光栅模板，得到含凝血酶的凝胶光栅；

(3)洗涤去除凝胶网络中的凝血酶

将含凝血酶的凝胶光栅置于PBS缓冲液中浸泡洗涤，以去除未完全聚合的反应物，然后取出置于盐酸胍与氯化钠的混合溶液中充分浸泡以去除含凝血酶的凝胶光栅的凝胶网络结构中的凝血酶，在盐酸胍与氯化钠的混合溶液中浸泡的过程中，每隔6～12h更换一次盐酸胍与氯化钠的混合溶液，浸泡完成后，取出置于PBS缓冲液中充分浸泡洗涤，即得分子印迹智能凝胶光栅。

6.根据权利要求5所述分子印迹智能凝胶光栅的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述盐酸胍与氯化钠的混合溶液中，盐酸胍的浓度为3～6mol/L、氯化钠的浓度为1～2mol/L。

7.根据权利要求5所述分子印迹智能凝胶光栅的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述PBS缓冲液的pH值为7.4、浓度为1～3mmol/L。

8.根据权利要求5至7中任一权利要求所述分子印迹智能凝胶光栅的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述基底为硅烷化处理的石英玻璃片。