[发明专利]无创产前筛查微缺失或微重复非配对参考品及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种无创产前筛查微缺失或微重复非配对参考品及其制备和应用，所述参考品包括非配对阳性参考品，还可以包括非配对阴性参考品；本发明的制备方法模拟细胞游离DNA制备方法，采用基因编辑的手段获得携带微缺失或微重复的细胞系，使用正常细胞系制备的cfDNA与携带微缺失或微重复的细胞系制备的cfDNA按一定比例混合，再与无DNA的血浆混合制成。本发明的参考品背景明确、模拟临床样品、成本低、可再生，适用于各种检测方法的三体综合征和微缺失或微重复综合征无创产前筛查，可用于不同测序方法及测序平台的质控检测，为胎儿游离DNA浓度的准确定值及不同综合征的风险评估提供了参考。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，特别涉及一种无创产前筛查微缺失或微重复非配对参考品及其制备和应用。

背景技术

现今，高龄孕妇数量增加使胎儿的染色体异常风险更高。随着基因检测技术的应用越来越广泛，无创产前筛查(Non-invasive prenatal screening，NIPS)成为了预防出生缺陷的重要手段。2020年美国妇产科医师学会发布了一套新的指南，建议对所有孕妇进行无创产前基因检测。NIPS通过采集孕妇静脉血，提取胎儿游离DNA(Cell-free fetal DNA，cffDNA)，采用高通量测序技术，基于全基因组大规模平行鸟枪、目标区域鸟枪法、基因芯片及核苷酸多态性的原理，结合生物信息分析，得出胎儿患染色体异常的风险，对于胎儿21-三体、18-三体和13-三体综合症具有高灵敏度和高特异性，目前已经大规模运用于临床常规筛查。但是人群发病率较高的染色体微缺失和微重复综合征(Microdeletion andmicroduplication syndromes，MMS)却没有纳入无创产前的筛查范围。染色体微缺失或微重复综合征(MMS)是由微小的、经传统细胞遗传学分析难以发现的染色体畸变而导致的具有复杂临床表现的遗传性疾病。染色体微缺失又称为微小片段缺失，是指染色体上缺失的片段，一般小于10Mb。染色体微缺失或微重复综合征常见临床表型为生长发育异常、智力发育迟缓、特殊面容、内脏器官畸形、内分泌异常、精神行为改变等。例如迪格奥尔格综合征是由于染色体22q11区段缺失导致，该综合征在新生儿中的发病率为1/4000～1/1000，比18三体综合征1/7000～1/3500的发病率还高，却不在NIPS的筛查范围内，许多类似的微缺失或微重复综合征(MMS)亟待被纳入检测，无创产前筛查在标准化和规范化检测的前提下需要升级筛查范围。

随着技术的进步，NIPS不仅仅可以检测21-三体综合征(唐氏综合征)、18-三体综合征(爱德华氏综合征)、13-三体综合征(帕陶氏综合征)，还可以通过技术优化扩展到检测染色体微缺失或微重复综合征，目前检测试剂盒在研发测试、注册申报和日常质控中均需要参考品，但目前国内相关领域的参考品尚未涵盖染色体微缺失和微重复综合征，且其制作及应用也缺乏规范化和产业化，极大制约了出生缺陷基因检测试剂的研发和注册工作，同时也影响行业内检测的准确性。目前，仅有针对21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的无创产前筛查的质控品，且其原料大部分来源于流产组织和正常未孕女性的血浆，其中流产组织具有无法再生、异质性较大及较难获得等缺陷，而正常未孕女性的血浆除了上述缺陷还具有背景复杂的问题，因此无法适用于除大规模平行鸟枪法以外的检测方法，这些缺陷制约着参考品标准化及产业化，甚至影响到NIPS筛查范围的升级。因此目前亟需一种背景明确、模拟临床样品、低成本、可再生及普适性的染色体微缺失或微重复参考品。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提出了一种无创产前筛查微缺失或微重复非配对参考品及其制备和应用。所述参考品包括非配对阳性参考品，还可以包括非配对阴性参考品；本发明的制备方法模拟细胞游离DNA(Cell free DNA，cfDNA)制备方法，采用基因编辑的手段获得携带微缺失或微重复的细胞系，使用正常细胞系制备的cfDNA与携带微缺失或微重复的细胞系制备的cfDNA按一定比例混合，再与无DNA的血浆混合制成。

本发明提供一种无创产前筛查微缺失或微重复非配对参考品，所述参考品包括非配对阳性参考品；