[发明专利]一种标记及追踪CD133阳性室管膜细胞的重组质粒、构建方法及鉴定方法在审
| 申请号： | 202110901887.1 | 申请日： | 2021-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN113699183A | 公开（公告）日： | 2021-11-26 |
| 发明（设计）人： | 孙臣友;周鹏;廖敏;崔怀瑞;李军伟;韦玉兵;谢明琦;李梦一;边维;王彤彤;叶鑫;陈治池;张鹏 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N15/66;C12N5/10;G01N21/64 |
| 代理公司： | 温州名创知识产权代理有限公司 33258 | 代理人： | 朱海晓 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 标记 追踪 cd133 阳性 室管膜 细胞 重组 质粒 构建 方法 鉴定 | ||
1. 一种标记及追踪CD133阳性室管膜细胞的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒是以质粒pCAG-cre为载体，在质粒pCAG-cre限制性酶切位点SpeI和EcoRI之间插入CD133-promoter2基因得到的CD133-promoter2-Cre重组质粒，所述CD133-promoter2基因序列为SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的标记及追踪CD133阳性室管膜细胞的重组质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）人工合成带有酶切位点SpeI和EcoRI序列的CD133-promoter2产物；
（2）将带有酶切位点SpeI和EcoRI序列的CD133-promoter2产物经SpeI和EcoRI双酶切，回收纯化带有CD133-promoter2基因的目的片段；
（3）将质粒pCAG-cre经SpeI和EcoRI双酶切，回收纯化酶切后的质粒pCAG-cre片段；
（4）将步骤（2）得到的带有CD133-promoter2基因的目的片段和步骤（3）得到的质粒pCAG-cre片段酶连组装；
（5）将步骤（4）酶连组装得到的产物转移到受体菌或细胞中进行转化克隆，繁殖筛选得到阳性克隆株，表达提取得到CD133-promoter2-Cre重组质粒。
3.根据权利要求2所述的标记及追踪CD133阳性室管膜细胞的重组质粒的构建方法，其特征在于：步骤（5）中，步骤（4）酶连组装得到的产物转移到DH5α感受态细菌中，培养后涂于含氨苄青霉素的平板上培养，然后调取阳性克隆接种于含氨苄青霉素的培养液中培养，然后提取得到重组质粒。
4.一种鉴定转染有如权利要求1所述的标记及追踪CD133阳性室管膜细胞的重组质粒的ROSA26-LacZ小鼠的CD133阳性室管膜细胞其子代细胞的方法，其特征在于：通过β-gal免疫荧光染色检测。
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