[发明专利]一种制备干细胞活性因子的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种制备干细胞活性因子的方法及其应用，属于细胞工程技术领域。它包括以下步骤：（1）干细胞的一级获取：取产妇脐带，随后加入胶原酶，并在振荡器上消化处理；（2）干细胞的二级获取：将一级获取的干细胞进行离心处理，取下层沉淀物，并进行清洗；（3）干细胞的三级获取：将二级获取的干细胞转移到培养基中，培养后进行扩增培养；（4）活性因子的抽提：将三级获取的干细胞转移到清洗槽中，离心处理收集上清液并过滤除菌，随后采用超声波破碎仪进行破碎并进行超滤处理；（5）保藏处理：将步骤（4）中抽提的活性因子，先用清洗液进行清洗，清洗后添加保护剂，置冷冻干燥机中，得到冻干粉。制备的干细胞活性因子满足使用要求。

技术领域

本发明属于细胞工程技术领域，具体地说，涉及一种制备干细胞活性因子的方法及其应用。

背景技术

细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somaticstem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell，TSC)、多能干细胞(pluripotentstemcell)和单能干细胞(unipotent stem cell)(专能干细胞)。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。

针对目前的干细胞因子分选技术，比较常见是的磁珠分选，但常规的分选中，磁珠会随同干细胞一同进行后续的培养，即磁珠并没有从干细胞上脱离下来，这样对于干细胞的后期生产，必定会产生一定的影响，虽然有一些方法，如加入一些菌或者其他物质进行降解，但这样也相当于加入了其他的外源蛋白质等成分，造成对干细胞的二次污染，所以实际上并没有解决上述问题。

发明内容

、要解决的问题

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种制备干细胞活性因子的方法及其应用，工艺简单，具体来说，制备的干细胞活性因子满足使用要求。

、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种制备干细胞活性因子的方法，包括以下步骤：

（1）干细胞的一级获取：取产妇脐带，清洗干净并剪碎，随后加入胶原酶，并在振荡器上消化处理；

（2）干细胞的二级获取：将步骤（1）中一级获取的干细胞进行离心处理，取下层沉淀物，并使用PBS缓冲液进行清洗；

（3）干细胞的三级获取：将步骤（2）中二级获取的干细胞转移到培养基中，培养后进行扩增培养；

（4）活性因子的抽提：将步骤（3）中三级获取的干细胞转移到清洗槽中，离心处理收集上清液并过滤除菌，随后采用超声波破碎仪进行破碎并进行超滤处理；

（5）保藏处理：将步骤（4）中抽提的活性因子，先用清洗液进行清洗，清洗后添加保护剂，置冷冻干燥机中，得到冻干粉。

上述所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用中，

步骤（1）中清洗使用的溶液为Hank’s平衡盐溶液；

步骤（1）中清洗使用的溶液的温度为4℃。

上述所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用中，

步骤（1）中胶原酶的添加质量为0.05%；

步骤（1）中振荡器的温度为37℃；

步骤（1）中消化时间为18min；

步骤（1）中胶原酶采购自北京索莱宝科技有限公司，其型号为胶原酶I，其货号为C8140。

上述所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用中，

步骤（2）中离心的转速为15000rpm；