[发明专利]一种制备干细胞活性因子的方法及其应用

权利要求书

1.一种制备干细胞活性因子的方法，其特征在于：

包括以下步骤：

（1）干细胞的一级获取：取产妇脐带，清洗干净并剪碎，随后加入胶原酶，并在振荡器上消化处理；

（2）干细胞的二级获取：将步骤（1）中一级获取的干细胞进行离心处理，取下层沉淀物，并使用PBS缓冲液进行清洗；

（3）干细胞的三级获取：将步骤（2）中二级获取的干细胞转移到培养基中，培养后进行扩增培养；

（4）活性因子的抽提：将步骤（3）中三级获取的干细胞转移到清洗槽中，离心处理收集上清液并过滤除菌，随后采用超声波破碎仪进行破碎并进行超滤处理；

（5）保藏处理：将步骤（4）中抽提的活性因子，先用清洗液进行清洗，清洗后添加保护剂，置冷冻干燥机中，得到冻干粉。

2.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（1）中清洗使用的溶液为Hank’s平衡盐溶液；

步骤（1）中清洗使用的溶液的温度为4℃。

3.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（1）中胶原酶的添加质量为0.05%；

步骤（1）中振荡器的温度为37℃；

步骤（1）中消化时间为18min；

步骤（1）中胶原酶采购自北京索莱宝科技有限公司，其型号为胶原酶I，其货号为C8140。

4.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（2）中离心的转速为15000rpm；

步骤（2）中离心的温度为4℃；

步骤（2）中PBS缓冲液的温度为4℃。

5.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（3）中培养基为DMEM培养基。

6.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（3）中扩增培养的条件如下：

37℃、5%CO₂、7d。

7.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（4）中离心处理的离心力为15000g；

步骤（4）中离心处理的温度为4℃。

8.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（4）中超滤处理的孔径为200道尔顿。

9.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（5）中清洗液包括生理盐水、醋酸钠及聚乙烯醇的混合物；

其中生理盐水、醋酸钠、聚乙烯醇三者之间的质量比为70：5：35。

10.根据权利要求1所述的制备干细胞活性因子的方法及其应用，其特征在于：

步骤（5）中保护剂为甘油，其中保护剂与活性因子之间的质量比为150：1。