[发明专利]癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片及其制备方法与在分离循环肿瘤细胞中的应用

权利要求书

1.一种癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

将癌细胞株的细胞悬液进行培养，待所述癌细胞贴壁后洗涤并固定，获得癌细胞膜基底；

将所述癌细胞膜基底于BSA溶液和NHS-S-S-Biotin溶液进行孵育，后在链酶亲和素溶液中浸泡，后PBS洗涤，加入将生物素化的抗EpCAM抗体溶液进行孵育，获得EpCAM抗体修饰的癌细胞膜基底；

将所述EpCAM抗体修饰的癌细胞膜基底与人骨PDMS整合，获得癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片，简称MHB-chip。

2.根据权利要求1所述的一种癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述固定采用质量为分数为2～3％的戊二醛溶液。

3.根据权利要求1所述的一种癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述癌细胞株包括乳腺癌细胞株、前列腺癌细胞株、结肠癌细胞株、肝癌细胞株、胃癌细胞株和肺癌细胞株中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述BSA溶液为浓度为5～20mg/mL的牛血清白蛋白溶液；所述NHS-S-S-Biotin溶液为将活化脂二硫键连接生物素溶解于DMSO中获得，所述NHS-S-S-Biotin溶液的浓度为0.05～0.5mg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述链霉亲和素溶液的浓度为40～60μg/mL；所述生物素化的抗EpCAM抗体溶液的浓度为10～30μg/mL。

6.一种采用权利要求1-5任一所述方法获得的癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片。

7.一种权利要求6所述的癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片在分离循环肿瘤细胞中的应用。

8.一种分离循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述方法采用权利要求6所述的癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片，包括：

从含有循环肿瘤细胞的血液样本中提取获得外周血单核细胞悬液；

将所述外周血单核细胞悬液通入所述癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片，从而捕获多个循环肿瘤细胞；

向所述捕获多个循环肿瘤细胞的芯片中通入DTT溶液以释放所述捕获的细胞，获得循环肿瘤细胞。

9.根据权利要求8所述的分离循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述外周血单核细胞悬液加入到所述癌细胞膜内嵌的人骨微流控芯片上的流速为0.25～0.5mL/h。

10.根据权利要求8所述的分离循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述DTT溶液的浓度为45～55uM。