[发明专利]趋化因子受体CCR6在制备抗肿瘤药物中的应用

权利要求书

1.趋化因子受体CCR6在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述趋化因子受体CCR6的氨基酸序列如下：

Met-Ser-Gly-Glu-Ser-Met-Asn-Phe-Ser-Asp-Val-Phe-Asp-Ser-Ser-Glu-Asp-Tyr。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述趋化因子受体CCR6为：修饰有Tn糖修饰的糖氨酸结构单元并连接有破伤风毒素蛋白辅助T细胞部分表位序列(TT_947-967)的趋化因子受体CCR6；

所述破伤风毒素蛋白辅助T细胞部分表位序列(TT_947-967)的氨基酸序列如下：

Phe-Asn-Asn-Phe-Thr-Val-Ser-Phe-Trp-Leu-Arg-Val-Pro-Lys-Val-Ser-Ala-Ser-His-Leu-Glu。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述Tn糖修饰的糖氨酸结构单元的制备方法如下：

以AgClO₄和Ag₂CO₃为混合催化剂，在严格无水条件下将糖基供体与糖基受体反应形成中间产物1；然后中间产物1在活化锌粉及乙酸酐作用下，C2位叠氮基被转化为N-乙酰氨基，再用三氟乙酸将羧基的保护基-叔丁酯切除，得到具有Tn糖修饰的糖氨酸结构单元；

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述糖基供体为3,4,6-三-O-乙酰基-2-叠氮-2-脱氧-α-D-半乳吡喃糖基溴，所述糖基受体为N-(9H-芴-9-基)甲氧羰基-L-丝氨酸叔丁基酯或N-(9H-芴-9-基)甲氧羰基-L-苏氨酸叔丁基酯。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述破伤风毒素蛋白辅助T细胞部分表位序列(TT_947-967)是通过三聚乙二醇氨酸连接臂连接至趋化因子受体CCR6。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述三聚乙二醇氨酸连接臂的制备方法如下：

以三聚乙二醇为起始原料，通过控制反应用量及滴加速度，使三聚乙二醇在金属钠催化下与丙烯酸叔丁酯发生Michael加成反应，然后通过甲磺酰氯将三聚乙二醇另一端羟基活化，并直接与叠氮化钠发生取代反应得到含叠氮基修饰的化合物，继续加入Pd/C催化剂同时通入氢气进行催化氢化反应将叠氮基还原为氨基，得到中间产物2，并进一步用Fmoc基团保护中间产物2的氨基；最后利用三氟乙酸脱除羧基的保护基叔丁酯，得到三聚乙二醇氨酸连接臂；

7.如权利要求2所述的应用，所述修饰有Tn糖修饰的糖氨酸结构单元并连接有破伤风毒素蛋白辅助T细胞部分表位序列(TT_947-967)的趋化因子受体CCR6，即为TT-CCR6糖肽，制备方法如下：

以预先负载有氨基酸的Wang树脂为起始物，采用标准Fmoc多肽固相合成法合成CCR6多肽，接着用Tn糖修饰的糖氨酸结构单元对CCR6多肽进行糖基化修饰，得到CCR6糖肽；再通过三聚乙二醇氨酸连接臂将破伤风毒素蛋白的一段辅助T细胞表位序列(TT_947-967)与CCR6糖肽进行连接，得到TT-CCR6糖肽。

8.一种抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述抗肿瘤疫苗包括权利要求1所述趋化因子受体CCR6或权利要求2所述修饰有Tn糖修饰的糖氨酸结构单元并连接有破伤风毒素蛋白辅助T细胞部分表位序列(TT_947-967)的趋化因子受体CCR6。

9.如权利要求8所述的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述抗肿瘤疫苗还包括佐剂；所述佐剂为壳聚糖/聚谷氨酸纳米颗粒。

10.如权利要求8所述的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述抗肿瘤疫苗的制备方法如下：

(1)将壳聚糖溶解于乙酸中，配置成浓度为0.5～1.5mg/mL的壳聚糖溶液，调节pH为4-6，在不断搅拌的条件下，向壳聚糖溶液中缓慢加入聚谷氨酸溶液，使溶液中正负电荷比为(2～10)：1，得到壳聚糖/聚谷氨酸纳米颗粒悬浊液，将悬浊液于4000～6000rpm下离心35～45min，去除上清液，并将沉淀物重悬在等量的双蒸水中，得到壳聚糖/聚谷氨酸纳米颗粒溶液；

(2)将趋化因子受体CCR6或TT-CCR6糖肽配置成1-5mg/mL的溶液，然后与步骤(1)制备的壳聚糖/聚谷氨酸纳米颗粒溶液混合均匀，得到壳聚糖纳米颗粒CCR6糖肽肿瘤疫苗；

其中，趋化因子受体CCR6溶液或TT-CCR6糖肽溶液与壳聚糖/聚谷氨酸纳米颗粒溶液的体积比为1：(8～10)。