[发明专利]人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂、重组乙肝疫苗、表达方法

说明书

本发明属于基因重组疫苗技术领域，具体涉及人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂、重组乙肝疫苗、表达方法。本发明提供人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂，在转染重组表达载体的HEK293细胞悬浮无血清培养过程中添加丁酸钠和氢化肉桂酸，并优选丁酸钠添加量为1.0~3.0 mol/L，氢化肉桂酸的添加量为0.2~1.0 mol/L，协同增效，提高重组蛋白表达量。试验表明，利用本发明提供的培养基添加剂，低温条件下培养，提高乙肝表面抗原（HBsAg）目的基因在HEK293细胞的表达水平。

技术领域

本发明属于基因重组疫苗技术领域，具体涉及人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂、重组乙肝疫苗、重组乙肝疫苗表达方法。

背景技术

乙型肝炎病毒感染是当今世界亟待解决的主要公共卫生问题之一，据估计，中国约60％的人受到过乙肝病毒感染，尽管世界卫生组织提出人们要在婴幼儿时期进行有效的乙肝疫苗接种，但全世界仍有3.5亿多人受到慢性乙肝病毒(HBV)感染，处于发生肝失代偿、肝硬化甚至肝癌的高风险之中。目前临床上的抗病毒治疗很难有效清除病毒，最经济有效的防控措施是注射乙肝表面抗原(HBsAg)即乙肝疫苗。

目前商业化的乙肝疫苗来源于中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovarycells，CHO)和酵母表达系统，在非人类哺乳动物细胞中产生的重组蛋白被修饰成两个不同于人类细胞的人类样聚糖结构，即N-羟甲基神经氨酸(Neu5Gc)和半乳糖-α-1,3-半乳糖基团。这种糖基化方式的差异可能在人类中具有高度免疫原性，因为有时会产生针对这两个聚糖结构的抗体，并可能从人体循环中迅速清除重组蛋白。

在人源化HEK293细胞中产生重组蛋白可以避免这种免疫原性，产生的蛋白质具有与人源化蛋白质一致的分子结构，理化性质和生物学功能。此外，HEK293可以通过瞬时表达快速产生重组蛋白。尽管HEK293细胞在重组治疗蛋白的产生方面有一些优点，但是蛋白产量较低的问题仍然亟待解决，进一步提高HEK293细胞表达系统的重组蛋白质表达量尤为重要。

发明内容

本发明的目的之一在于提供人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂，目标蛋白表达载体转染HEK293细胞后，通过在培养基中同时添加丁酸钠和氢化肉桂酸，提高目标蛋白的表达量。

本发明的目的之二在于提供重组乙肝疫苗，构建以CAG为启动子，包括乙肝表面抗原基因序列的表达载体，转染人源化HEK293细胞，在本发明培养基添加剂的作用下培养，提高重组蛋白表达量。

同时，本发明还在于提供一种重组乙肝疫苗表达方法，利用本发明培养基添加剂，低温条件下培养，提高重组蛋白表达量。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂，包括丁酸钠和氢化肉桂酸。

作为优选的，重组蛋白表达载体转染HEK293细胞，悬浮培养过程中添加上述培养基添加剂；其中丁酸钠添加量为1.0～3.0mol/L，氢化肉桂酸的添加量为0.2～1.0mol/L。进一步的，悬浮培养采用无血清培养基。

更进一步的，重组蛋白载体转染HEK293细胞，悬浮培养24小时后添加所述培养基添加剂。

重组乙肝疫苗表达方法，包括将包含乙肝表面抗原序列的表达载体转染HEK293细胞，悬浮培养过程中添加上述培养基添加剂。作为优选的，丁酸钠添加量为1.0～3.0mol/L，氢化肉桂酸的添加量为0.2～1.0mol/L。进一步的，悬浮培养采用无血清培养基。

更进一步的，上述重组乙肝疫苗表达方法，将包含乙肝表面抗原序列的表达载体转染HEK293细胞，悬浮培养24小时后添加上述培养基添加剂。