[发明专利]一种可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法在审
| 申请号： | 202110892083.X | 申请日： | 2021-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN113444671A | 公开（公告）日： | 2021-09-28 |
| 发明（设计）人： | 严秋萍;马昭明;陈山岭;任昭源;王明珠;杨远超;谢雨婷 | 申请（专利权）人： | 成都可恩生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/32 |
| 代理公司： | 成都天嘉专利事务所(普通合伙) 51211 | 代理人： | 赵玉玲 |
| 地址： | 610200 四川省成都市天府国际*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 替代 马铃薯 培养基 卡介菌 菌种 传代 培养 方法 | ||
1.一种可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
A．复苏：将卡介菌工作种子批接种罗氏鸡蛋培养基上复苏，得罗氏鸡蛋培养基菌种；
B．洗脱：向罗氏鸡蛋培养基菌种加入浸润液，浸润3-5min，洗脱；
C．研磨：将经洗脱后的菌液加入至研磨器中，研磨，形成均匀的菌悬液；
D．培养：将菌悬液接种至苏通培养基中，在37-39℃条件下静置培养10-14d，生成菌膜，收获菌膜，备用。
2.根据权利要求1所述的可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法，其特征在于，在步骤A中，1支卡介菌工作种子批可接种至8-10支罗氏鸡蛋培养基上复苏，其中，卡介菌工作种子批规格为0.4-0.5mg/支，罗氏鸡蛋培养基规格为15-35mL/支。
3.根据权利要求1或2所述的可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法，其特征在于，在步骤B中，所述浸润液为苏通培养基、稀释苏通培养基、生理盐水或PBS。
4.根据权利要求1所述的可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法，其特征在于，在步骤B中，所述浸润液为苏通培养基。
5.根据权利要求1或2所述的可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法，其特征在于，在步骤C的研磨器中，顺时针旋转研磨30-50次，逆时针旋转研磨30-50次，直至形成均匀的菌悬液。
6.根据权利要求5所述的可替代苏通马铃薯培养基的卡介菌菌种传代培养方法，其特征在于，在步骤D中，用毛细吸管收集研磨器中的菌悬液，混匀；然后，吸取混匀后的菌悬液接种到苏通培养基中，混匀菌悬液和苏通培养基，培养，形成菌膜，收取，于2-8℃条件下保存，备用；
其中，苏通培养基分装于50-100mL的三角瓶中，分装量为20-30mL，每个三角瓶接种1mL菌悬液。
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