[发明专利]一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌RS6-14及其所产抗菌提取物的提取方法和应用

说明书

本发明公开了一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌RS6‑14及其所产抗菌提取物的提取方法和应用。所述贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6‑14分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，保藏编号为CGMCC No.22682；其菌落为近圆形至椭圆形、乳白色至白色，表面微凸、呈微褶皱状、无光泽、不透明，边缘明显清晰，菌落周围具有较宽的透明圈，菌体呈杆状。本发明利用贝莱斯芽孢杆菌RS6‑14菌株经过发酵、大孔吸附树脂初提和液相色谱精提后，得到具有很好抑制多种病原细菌的抗菌提取物，其性质稳定，活性好，不仅具有成为新型抗菌剂的潜力，同时，还能有效降低病原菌对养殖动物的危害，减少养殖损失。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌RS6-14及其所产抗菌提取物的提取方法和应用。

背景技术

革兰氏阴性菌比革兰氏阳性菌细胞壁薄，且结构较复杂，分为外膜和肽聚糖层。外膜阻止某些药物和抗生素穿入细胞，这是革兰氏阴性细菌一般较之革兰氏阳性细菌更耐药的原因。由于抗生素的滥用，近十年来，革兰氏阴性细菌耐药问题日益严重，突出表现在耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌和非发酵糖细菌，如大肠杆菌、志贺菌中。

在水产及禽类养殖中，革兰氏阴性病原菌是一大危害，其中大肠杆菌和沙门氏菌会导致养殖动物腹泻，危害动物肠道健康。弧菌会导致虾或某些经济鱼类发生表皮或组织溃烂，严重破坏了养殖经济。据统计，水产行业中，全球每年因为病害损失的经济高达60亿美元。

由于多重耐药菌和广泛耐药菌的大量出现，新型抗菌剂的研发迫在眉睫。为控制耐药菌感染，各国致力于筛选具有新结构类型和新作用机制或新作用靶位的新药，并在抗菌剂的作用机制、耐药机制、构效关系等研究成就的指导下，修饰现有抗菌剂的化学结构，获取优化的品种。而微生物分布广阔，代谢产物多样，是理想的新抗菌化合物的宝库，无论是直接应用或是修饰改造，都大有可为。

发明内容

本发明提供了一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌RS6-14及其所产抗菌提取物的提取方法和应用。所述贝莱斯芽孢杆菌RS6-14对多种病原菌具有很好的抑制作用，其提取得到的抗菌提取物具有很好的抗菌活性。

为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现：

本发明提供了一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14，其分类命名为贝莱斯芽孢杆菌  Bacillus velezensis，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 22682。

进一步的，所述贝莱斯芽孢杆菌RS6-14菌落为近圆形至椭圆形、乳白色至白色，表面微凸、呈微褶皱状、无光泽、不透明，边缘明显清晰，菌落周围具有较宽的透明圈，菌体呈杆状。

本发明还提供了一种利用所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14提取抗菌提取物的方法，包括如下步骤：

（1）将所述贝莱斯芽孢杆菌RS6-14接种于TSBYEH培养基中，28℃，180rpm条件下培养12h得到一级种子液，取培养好的一级种子100μl液接种于250ml的三角瓶中，装液量为50ml，同样条件下培养8h，得到二级种子液；将得到的种子液以2%的体积比接种到改良Landy培养基中，30℃，装液量为20L，初始pH为7.0，初始搅拌速率为200rpm，通气量为10 L/min-15 L/min，发酵25-36h，得到发酵液；