[发明专利]一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌RS6-14及其所产抗菌提取物的提取方法和应用

权利要求书

1.一株深海来源的贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14，其特征在于：其分类命名为贝莱斯芽孢杆菌 Bacillus velezensis，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 22682；所述贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14菌落为近圆形至椭圆形、乳白色至白色，表面微凸、呈微褶皱状、无光泽、不透明，边缘明显清晰，菌落周围具有较宽的透明圈，菌体呈杆状。

2.一种利用权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14提取抗菌提取物的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）将所述贝莱斯芽孢杆菌RS6-14接种于TSBYEH培养基中，28-32℃，发酵15-22h，将得到的种子液以2-5%的体积比接种到改良Landy培养基中，28-32℃，发酵25-36h，得到发酵液；所述TSBYEH培养基的组分包括胰蛋白胨1.5%，大豆蛋白胨0.5%，酵母粉0.5%，海水素3%和蒸馏水1L；

（2）将发酵液离心，取发酵上清液与经预处理的大孔吸附树脂进行动态吸附，在室温条件下吸附18-24 h；吸附后的废液分别用2-5倍体积的水洗，再依次用2- 5倍体积的梯度乙醇进行洗脱，收集洗脱液；将洗脱液于40-42℃的条件下浓缩，去除乙醇；将浓缩液经冷冻、真空干燥后，得到粗提物；

（3）取粗提物复溶后，利用滤膜过滤，采用液相色谱进一步分离纯化，流动相A为乙腈，流动相B为超纯水，然后梯度洗脱，最终得到抗菌提取物。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（1）中改良Landy培养基的组分包括2%的葡萄糖，L-谷氨酸钠0.5%，MgSO₄·7H₂O 0.05%， KCl 0.05%，KH₂PO₄ 1%，FeSO₄·7H₂O 0.15 mg，MnSO₄·H₂O 5.0 mg，CuSO₄·5H₂O 0.16 mg，酵母粉0.5%和蒸馏水1L。

4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（2）中发酵上清液与大孔吸附树脂体积质量比为10:1。

5.由权利要求2所述的方法提取得到的抗菌提取物。

6.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14或者权利要求5所述的抗菌提取物在制备抑制病原菌的抗菌剂中的应用，其特征在于：所述病原菌为大肠杆菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌、坎氏弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、金黄色葡萄球菌。

7.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14在制备改善水产养殖水体的制剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：在应用时，将所述贝莱斯芽孢杆菌菌株RS6-14经发酵制成菌活为1.0×10⁹CFU/ml的液体发酵剂，并以5 ml/m³-10 ml/m³的用量一次性泼洒水产养殖水体。