[发明专利]基因突变位点的用途及突变位点检测方法

权利要求书

1.基因位点在制备甲状腺癌防治药物和/或制备甲状腺癌检测试剂中的应用，其中，所述基因位点为下述任一

优选的，PTEN-p.P248L基因位点、PTEN-p.T319fs基因位点分别具有权利要求8中所述PTEN-p.P248L位点突变、PTEN-p.T319fs位点突变。

2.检测权利要求1中基因位点的试剂在制备甲状腺癌检测试剂中的应用。

3.检测甲状腺癌的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括检测权利要求1中基因位点的组分；优选的，所述检测试剂包括用于扩增所述基因位点的核苷酸序列引物对和/或捕获所述基因位点的捕获探针。

4.权利要求3中的检测甲状腺癌的检测试剂在制备评估甲状腺癌治疗疗效的产品中的应用。

5.权利要求1中所述基因位点表达的抑制剂在制备治疗甲状腺癌药物中的用途。

6.甲状腺癌的防治药物，其特征在于，所述防治药物包括抑制权利要求1中所述基因位点表达的药物。

7.根据权利要求1-6任一所述应用或药物，所述甲状腺癌包括甲状腺乳头状癌。

8.突变PTEN基因，其特征在于，所述突变PTEN基因至少包括下述一种位点突变：

PTEN-p.P248L位点突变，碱基变化为c.743CT；

PTEN-p.T319fs位点突变，碱基变化为c.955_956insAA。

9.高通量测序中捕获方法，其特征在于，包括下述步骤：

A部：

a1,获取磁珠重悬液，

a2,在磁珠重悬液中加入捕获磁珠，待澄清去除上清，

a3,再加入磁珠重悬液，离心去除上清，重复若干次，制得重悬捕获液；

B部：

将PCR产物与重悬捕获液混合，吹打重悬捕获磁珠，PCR孵育，保持捕获磁珠处于悬浮，得捕获样本。

10.根据权利要求9所述高通量测序中捕获方法，其特征在于，还包括下述步骤：

C部：

c1,捕获样本中加入捕获清洗液，离心去除上清，

c2,加入捕获清洗液，孵育，离心去除上清，优选的，重复若干次，

c3,加入捕获清洗液，离心去除上清，优选的，重复若干次，

c4,加入无核酸酶水，得清洗产物；

D部：

将捕获反应液、捕获引物和产物混合，

进行扩增反应，

加入纯化磁珠，离心去除上清，

加入乙醇，旋转静置，去上清，重复若干次，

磁力作用，去除废液，

磁珠干燥后加入无核酸水，离心后磁力处理，取上清液。

11.根据权利要求10所述的高通量测序中捕获方法，其特征在于，

A部中，磁珠重悬液中无核酸酶水的体积浓度为45％～55％，优选为50％，a3中再加入磁珠重悬液后振荡；

B部中，PCR孵育孵育条件为60-65℃；

C部中，加入的捕获清洗液中无核酸酶水的体积浓度为85％～95％，优选为95％；和/或

c1、c4中，捕获清洗液进行预热；和/或

c3中，第一加入的捕获清洗液进行预热；

优选的，c1、c4中捕获清洗液预热温度、c3中第一加入的捕获清洗液进行预热温度均为60-65℃；和/或

D部中，捕获反应液、捕获引物和带磁珠产物混合体积比为5：1：4，

扩增反应为PCR扩增，热盖温度为103-107℃，优选为105℃。