[发明专利]一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂、试剂盒和应用

说明书

本发明提供了一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂、试剂盒和应用，涉及生物检测技术领域。本发明提供了所述试剂包括人组胺受体HRH4的特异性引物和探针，所述特异性引物包括HRH4‑F和HRH4‑R，所述探针包括H4‑Probe；所述HRH4‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HRH4‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述H4‑Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明基于该试剂制备了一步法检测试剂盒，可一步法定量检测HRH4 mRNA的表达水平，操作方法简单，检测时间较短，为H4抗组胺药提供了可指导用药及准确量化疗效的试剂盒产品。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂、试剂盒和应用。

背景技术

组织胺(Histamine)是一种活性胺化合物，是广泛存在于动植物体内的一种生物胺，是由组氨酸脱羧而形成的，通常贮存于组织的肥大细胞中，是身体内的一种重要的化学传导物质，可以影响许多细胞的反应，包括过敏、炎性反应、胃酸分泌等，当机体受到某种刺激引发抗原-抗体反应时，引起肥大细胞的细胞膜通透性改变，释放出组胺，与组胺受体作用产生病理生理效应。组胺合成过程主要发生在肥大细胞、嗜碱性粒细胞、肺部、皮肤和胃肠粘膜中，和储存组胺的组织相一致。组胺与其他递质一样，先和靶细胞上特异性受体结合，从而改变细胞的生物活性，并发挥广泛的生理或病理作用。组胺的炎症作用，即组胺对体内的免疫动态平衡的影响依赖于现行已知的4个组胺受体的表达和活性。这4个组胺受体按被发现顺序命名为：组胺1型受体(H1)、组胺2型受体(H2)、组胺3型受体(H3)、组胺4型受体(H4)，其中，H4受体优势分布于免疫系统或造血相关的组织或细胞，在骨髓、外周造血细胞等与炎症反应相关的部位高度表达。因此H4受体在免疫性疾病如过敏反应、哮喘等中成为新的治疗靶位。H4受体参与肥大细胞、嗜酸性粒细胞、树突状细胞的趋化作用以及T细胞、树突状细胞的细胞因子的产生，参与炎性反应。

大部分过敏性疾病患者的治疗方式都是医生凭经验采用对症治疗，用抗组胺药来减轻过敏症状。以H1受体为靶标的抗组胺药对于一些过敏性患者有效，但也有局限性。H4受体拮抗剂的应用则可对部分H1受体拮抗剂无效的患者起到良好的治疗效果。但用抗组胺治疗并非对所有患者有效，也无法量化治疗效果，长期服药还会产生一系列的副作用，但是目前没有相关的研究和记载。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂、试剂盒和应用，可利用RNA一步检测人组胺受体HRH4 mRNA的表达水平，为该蛋白的检出提供准确度高、检测范围广及灵敏度高的检测手段。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂，所述试剂包括人组胺受体HRH4的特异性引物和探针，所述特异性引物包括HRH4-F和HRH4-R，所述探针包括H4-Probe；

所述HRH4-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HRH4-R的核苷酸序列如SEQID NO.2所示，所述H4-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

优选的，所述试剂还包括内参基因GAPDH的特异性引物和探针，所述内参基因GAPDH的特异性引物包括GAPDH-F和GAPDH-R，所述探针包括G-Probe；

所述GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述GAPDH-R的核苷酸序列如SEQID NO.5所示，所述G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

优选的，在所述H4-Probe和G-Probe的5’端分别标记不同的荧光报告基团，3’端标记标记相同或不同的淬灭基团。

优选的，所述荧光报告基团包括FAM和JOE，所述淬灭基团包括BHQ1。