[发明专利]一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂、试剂盒和应用

权利要求书

1.一种检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂，其特征在于，所述试剂包括人组胺受体HRH4的特异性引物和探针，所述特异性引物包括HRH4-F和HRH4-R，所述探针包括H4-Probe；

所述HRH4-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HRH4-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述H4-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述试剂，其特征在于，所述试剂还包括内参基因GAPDH的特异性引物和探针，所述内参基因GAPDH的特异性引物包括GAPDH-F和GAPDH-R，所述探针包括G-Probe；

所述GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，所述G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求1或2所述试剂，其特征在于，在所述H4-Probe和G-Probe的5’端分别标记不同的荧光报告基团，3’端标记标记相同或不同的淬灭基团。

4.根据权利要求3所述试剂，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM和JOE，所述淬灭基团包括BHQ1。

5.根据权利要求1或2所述试剂，其特征在于，所述试剂中，HRH4-F、HRH4-R、H4-Probe、GAPDH-F、GAPDH-R和G-Probe的浓度分别为2.25nM、1.5nM、1.5nM、1nM、1nM、1.5nM。

6.一种一步法检测人组胺受体HRH4 mRNA表达水平的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～5任一项所述试剂，PCR反应液、酶混合液、ROX参比染料和无核酶水。

7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括dNTP mix、MgCl₂和缓冲液；

所述酶混合液包括Taq酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂和Taq酶抗体；所述Taq酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂和Taq酶抗体的质量比为15:5:4:1。

8.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括人组胺受体HRH4的RNA标准品。

9.权利要求1～5任一项所述试剂或权利要求6～8任一项所述试剂盒在制备免疫性疾病治疗用药依据或动态监测治疗效果的工具中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，利用所述试剂或所述试剂盒配制反应体系，并进行qRT-PCR反应；

所述反应体系以20μl计，包括：无核酶水2.4μl，PCR反应液10μl，酶混合液0.5μl，ROX参比染料0.5μl，所述试剂2μl和标准品或RNA 5μl；

所述qRT-PCR反应的程序包括：42℃30min；95℃1min；95℃5s，60℃31s，40个循环。