[发明专利]一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法

说明书

本发明公开了一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法。所述透气膜用于培养室，用以培养高产量水痘病毒。所述透气膜依次包括透气层、细胞粘附层；所述透气层为聚二甲基硅氧烷复合膜；所述细胞粘附层为聚己内酯复合膜。有益效果：(1)调控制备了可增强氧气渗透率的聚二甲基硅氧烷复合膜为水痘病毒的培养提供氧气，协同二氧化碳培养箱，有效解决二氧化碳、氧气气体交换问题。(2)调控制备了可增强细胞粘附性的聚己内酯复合膜，增强水痘病毒的粘附和扩散。(3)利用稀释的聚二甲基硅氧烷将聚二甲基硅氧烷复合膜和聚己内酯复合膜复合，形成兼具透气性和细胞粘附双性能的透气膜，协同增强水痘病毒的增殖分化，实现高产量培养。

技术领域

本发明涉及水痘病毒培养技术领域，具体为一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法。

背景技术

水痘是一种由带状孢疹病毒感染引起的传染病，因此需要培养水痘病毒制备疫苗预防水痘。其中，水痘病毒培养中不可缺少需要氧气，常见的培养器中，氧气通常是来自顶部气液界面向底部单项的扩散运动，而水痘病毒培养一般是静态培养，没有介质流动，因此，在培养过程中存在高细胞密度的水痘病毒，当溶解氧到底部时，氧气已经接近耗尽，使得水痘病毒质量存在不均匀性。解决问题的方式是采用透气膜提供氧气，平衡溶解氧在细胞培养器的底部，从而增加水痘病毒细胞的质量均匀性，增强底部细胞的生长和代谢，从而增加水痘病毒的产量。

而现有的透气膜，通常为氟化乙烯丙烯膜、聚碳酸酯膜、聚苯乙烯膜，该类膜通常是具有疏水和透气性的膜，不具有氧气的选择性，且渗透性慢，影响氧气提供，从而影响水痘病毒的增殖。另一方面，该类膜通常都细胞粘附性不佳，而粘附会产生细胞周期、细胞分化、细胞迁移和细胞生存等刺激信号，有利于细胞的增殖分化。

因此，解决氧气渗透性和细胞粘附的问题，增强氧气渗透率和细胞粘附性，制备一种高产量水痘病毒培养用透气膜具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

水痘病毒的培养方式为：(1)细胞复苏：将MRC-5细胞加入至含10～20％新生牛血清的M199-801培养液中，设置温度为37℃水浴，解冻，溶解离心，加入细胞生长液重悬细胞，转移，设置温度为37℃，培养3～4天，得到细胞；(2)细胞传代：使用37℃预温的0.01mol/LPBS液洗涤细胞表面两次，加入EDTA-Trypsin消化液，消化1～2分钟，去除消化液，加入细胞培养液，按照1:4～1:8传代比例进行传代；(3)病毒接种：当细胞单层融合度为80～90％时，将水痘病毒的种子批执行感染，感染复数为0.001～0.01；(4)病毒培养：将感染后的细胞在维持液为2～5％的新生牛血清，pH＝7.2～7.4的M199-801培养液，维持液量为0.2～0.3mL/cm²的条件下进行培养。

本专利中制备的透气膜，用于培养室，利用透气膜中氧气选择性渗透性，结合5％浓度的二氧化碳培养箱，有效控制溶氧，使得MRC-5细胞达到最佳生长状态，有效增强水痘病毒细胞的增殖，提高培养液中病毒的滴度。

透气膜安装后进行了钴60灭菌处理；透气膜中使用时，聚己内酯复合膜一侧接触细胞培养器的内部，可接触培养液，增强细胞粘附；聚二甲基硅氧烷一侧与外部环境接触，其具有疏水性，有效防水，防止污染物的进入。

一种高产量水痘病毒培养用透气膜，所述透气膜依次包括透气层、细胞粘附层；所述透气层为聚二甲基硅氧烷复合膜；所述细胞粘附层为聚己内酯复合膜。

较为优化地，所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，90～100份聚二甲基硅氧烷、20～25份氧化锆前体、8～10份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。

较为优化地，所述酞菁钴@碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计， 9～12份聚丙烯吡咯烷酮、6～10份多壁碳纳米管、8～11份酞菁钴。