[发明专利]一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法

权利要求书

1.一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述透气膜用于培养室，用以培养高产量水痘病毒；所述透气膜依次包括透气层和细胞粘附层；所述透气层为聚二甲基硅氧烷复合膜；所述细胞粘附层为聚己内酯复合膜；所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，90～100份聚二甲基硅氧烷、20～25份氧化锆前体、8～10份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。

2.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述酞菁钴/碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计，9～12份聚丙烯吡咯烷酮、6～10份多壁碳纳米管、8～11份酞菁钴。

3.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述细胞粘附层的原料包括以下组分：按重量计，50～60份聚丙烯、20～26份聚己内酯、10～20份精氨酸。

4.一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：将透气膜安装在培养室中，聚己内酯复合膜一侧接触细胞培养器的内部，可接触培养液；聚二甲基硅氧烷一侧与外部环境接触；进行钴60灭菌处理，得到水痘病毒培养室；

步骤2：水痘病毒的培养：(1)细胞复苏：将MRC-5细胞加入至含10～20％新生牛血清的M199-801培养液中，设置温度为37℃水浴，解冻，溶解离心，加入细胞生长液重悬细胞，转移，设置温度为37℃，培养3～4天，得到细胞；(2)细胞传代：使用37℃预温的0.01mol/LPBS液洗涤细胞表面两次，加入EDTA-Trypsin消化液，消化1～2分钟，去除消化液，加入细胞培养液，按照1:4～1:8传代比例进行传代；(3)病毒接种：当细胞单层融合度为80～90％时，将水痘病毒的种子批执行感染，感染复数为0.001～0.01；(4)病毒培养：将感染后的细胞在维持液为2～5％的新生牛血清，pH＝7.2～7.4的M199-801培养液，维持液量为0.2～0.3mL/cm²的条件下进行培养。

5.根据权利要求4所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：透气膜的制备方法包括以下步骤：

S1：将聚丙烯和聚己内酯溶解在DMF-二氯甲烷混合溶剂中，作为纺丝溶液，静电纺丝，得到纤维膜；将其置于精氨酸水溶液中，振荡反应，用水洗涤，得到聚己内酯复合膜；

S2：将氧化锆前体加入正己烷溶剂中搅拌溶解；加入聚二甲基硅氧烷搅拌；加入酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮搅拌均匀，均质化，得到铸膜溶液；将其涂布在模板上，脱气，初干燥，得到聚二甲基硅氧烷复合膜；

S3：将聚己内酯复合膜其中一面喷涂聚二甲基硅氧烷水溶液，并以其为接触面，覆盖在聚二甲基硅氧烷复合膜上，初干燥，终干燥，拉伸，得到透气膜。

6.根据权利要求5所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：步骤1中，静电纺丝条件：温度为23～28℃，相对湿度为48～52％，送料速度为0.4～0.6mL/h，接收距离为15cm，电压为12～15Kv；所述精氨酸水溶液的浓度为0.1～0.5mol/L；振荡反应的条件为：温度为28～42℃，时间为1～2小时。

7.根据权利要求5所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：步骤S2中，所述酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的培养方法为：设置温度为0～3℃，将亚硝酸钠溶液加入至吡啶溶液中混合，加入多壁碳纳米管分散液，搅拌反应2～3小时；设置温度为25～28℃，搅拌反应8～10小时，洗涤至中性，干燥；惰性气体下，将其超声分散在溶剂中，加入酞菁钴，设置温度为70～75℃回流2～3小时，洗涤过滤；将其与聚丙烯吡咯烷酮分散在DMF-水中，超声6～8小时，洗涤干燥，得到酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。

8.根据权利要求5所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：步骤S2中，聚二甲基硅氧烷水溶液的浓度为3～6wt％；初干燥温度为60～70℃，时间为12小时；终干燥温度为145～155℃，时间为2天。