[发明专利]评估USH2A外显子13剔除效率的MINI-REP基因及其表达载体和应用

权利要求书

1.一种评估USH2A外显子13剔除效率的MINI-REP基因，其特征在于，包括报告基因和小基因，所述报告基因为行使报告功能的基因，所述小基因包括依次连接的USH2A内含子12、外显子13和内含子13的基因；所述小基因插入所述报告基因，将所述报告基因分割成断裂报告基因，所述断裂报告基因单独表达均不发挥报告功能，串联完整表达则发挥报告功能。

2.根据权利要求1所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述内含子12的基因由内含子12的5’端长度为50-200bp的基因片段和3’端长度为200bp-1700bp的基因片段按照5’-3’顺序串联得到，所述内含子13的基因由内含子13的5’端长度为200bp-1700bp的基因片段和3’端长度为50-200bp的基因片段按照5’-3’顺序串联得到。

3.根据权利要求2所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述内含子12的基因5’段片段长度为192-204bp，3’端片段长度为490-1611bp，所述内含子13的基因5’段片段长度为706-1599bp，3’端片段长度为216bp。

4.根据权利要求3所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述内含子12的基因包括以下区域及相似性≥90％的序列：内含子12的剪接沉默子ISS、外显子13的剪接的分支位点BP、外显子13的剪接受体SA、外显子13的剪接供体SD或外显子13的剪接增强子ESE；

所述内含子13的基因包括以下区域及相似性≥90％的序列：内含子13的剪接增强子ISE或内含子13的聚嘧啶束。

5.根据权利要求1所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述报告基因选自：荧光蛋白基因或酶标记基因。

6.根据权利要求5所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述报告基因为绿色荧光基因EGFP。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的MINI-REP基因，其特征在于，将所述小基因插入所述报告基因内连续2个G碱基之间。

8.根据权利要求7所述的MINI-REP基因，其特征在于，将所述小基因插入绿色荧光基因EGFP序列AGGT的2个G碱基之间。

9.根据权利要求1所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述外显子13的基因包括以下致病突变中的至少一种：c.2802TG(p.Cys934Trp)、c.2299delG(p.E767SfsX21)、c.2276GT(p.C759F)、c.2522CA(p.S841Y)、c.2242CT(p.Gln748X)、c.2541CA(C847X)、c.2761delC(Leu921fs)和c.2776CT(p.R926C)、c.2209CT、c.2310delA、c.2391_2392deITG、c.2431AT、c.2431_2432delAA、c.2440CT、c.2525dup、c.2610CA、c.2755CT、c.2176TC、c.2236CG、c.2296TC和c.2332GT。

10.根据权利要求9所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述外显子13的致病突变包括c.2802TG或c.2299delG。

11.根据权利要求10所述的MINI-REP基因，其特征在于，所述外显子13的致病突变为c.2802TG。

12.一种表达权利要求1-11任一项所述MINI-REP基因的表达载体。

13.一种包括权利要求12所述表达载体的报告基因评估细胞，其特征在于，该评估细胞由所述表达载体瞬时转染和/或稳定转染宿主细胞构建得到。