[发明专利]一种番鸭细小病毒POCT检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种番鸭细小病毒POCT检测试纸条及其制备方法和应用，属于检测试剂领域，该试纸条包括底板以及依次搭接固定于所述底板上的样品垫、结合垫、检测膜和吸水垫；其中，所述结合垫上喷涂有荧光微球标记抗体，所述荧光微球标记抗体为采用荧光微球标记的MDPV抗体Ⅰ和兔抗羊IgG抗体的偶联物；所述检测膜上包被有检测抗体，所述检测抗体包括MDPV抗体Ⅱ和兔抗羊IgG抗体；其中，所述MDPV抗体Ⅱ用作检测线，所述兔抗羊IgG抗体用作质控线；该试纸条特异性强、敏感性高、重复性好，可以定性或定量检测番鸭细小病毒。

技术领域

本发明涉及检测试剂领域，特别是涉及一种番鸭细小病毒POCT检测试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

雏番鸭细小病毒病是由番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)引起的一种急性、败血性传染病，具有高度传染性和死亡率。MDPV主要侵害3周龄以内雏鸭，又称为“三周病”。该病发病率和死亡率可达40％以上，病愈鸭大部分成为僵鸭，是目前番鸭饲养业中危害最严重的传染病之一，严重地影响了养鸭业的发展。

鹅细小病毒(Goose Parvovirus，GPV)与番鸭细小病毒同属于细小病毒科依赖病毒属，主要侵害一月龄以下的雏鹅和雏番鸭。MDPV和GPV均可感染雏番鸭，两者发病日龄相近，临床上常在同一地区流行，甚至混合感染。这两种病流行病学相似，且两种病原在病毒大小、形态结构、理化特性上相似性很高，DNA序列和氨基酸序列的同源性高于80％。导致两者抗原性上高度同源，在血清学上存在交叉反应性和交叉保护性，因此临床上鉴别诊断难度较大。

为了能快速准确地鉴别这两种病毒，已经建立了针对病原的多种PCR鉴别诊断方法、LAMP、套式PCR方法等鉴别诊断方法。但在血清学诊断方面，常规的血清学检测方法很难将这两种病毒区分开来。琼脂扩散试验、乳胶凝集试验、荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验等常规的血清学检测方法操作较复杂、所需时间较长。POCT，即时检验(point-of-caretesting)，是一种在采样现场进行的、利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的检测方式，可省去标本在实验室检验的复杂处理程序，快速得到检验结果。因此，采用POCT技术研制一种番鸭细小病毒POCT检测试纸条，具有十分重要的社会意义和经济意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种番鸭细小病毒POCT检测试纸条及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，实现对番鸭细小病毒的快速、准确的定性和定量检测。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种番鸭细小病毒POCT检测试纸条，包括底板以及依次搭接固定于所述底板上的样品垫、结合垫、检测膜和吸水垫；

其中，所述结合垫上喷涂有荧光微球标记抗体，所述荧光微球标记抗体为采用荧光微球标记的MDPV抗体Ⅰ和兔抗羊IgG抗体的偶联物；

所述检测膜上包被有检测抗体，所述检测抗体包括MDPV抗体Ⅱ和兔抗羊IgG抗体；其中，所述MDPV抗体Ⅱ用作检测线，所述兔抗羊IgG抗体用作质控线。

进一步地，所述结合垫上荧光微球标记抗体的喷涂量为0.04-0.05μg/cm，优选为0.048μg/cm，所述检测膜上检测抗体的包被量分别为0.4-1.2μg/cm。

进一步地，采用番鸭胚繁殖的MDPV病毒尿囊液纯化得到的MDPV病毒作为抗原，经动物免疫，制备MDPV抗体Ⅰ和MDPV抗体Ⅱ，得到的4株单克隆抗体，包括MDPV Ab1#、MDPVAb2#、MDPV Ab3#和MDPV Ab4#。

进一步地，所述荧光微球标记抗体的制备方法，包括以下步骤：

荧光微球加入到2-吗啉乙磺酸中，混匀；再加入NHS和EDC进行活化；

除去未反应或残余的反应物后，离心，复溶，加入待标记抗体，偶联1-3h；