[发明专利]一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、第一轮多重PCR反应：包括T1反应管体系、T2反应管体系和T3反应管体系；T1反应管体系包括第一引物池和第一反应液；T2反应管体系包括第二引物池和第二反应液；T3反应管体系包括第三引物池和第三反应液；

所述第一引物池包括58对引物，58对引物的上下游引物的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.116所示；

所述第二引物池包括57对引物，57对引物的上下游引物的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.117-SEQ ID NO.230所示；

所述第三引物池包括3对引物，3对引物的上下游引物的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.231-SEQ ID NO.236所示；

S2、多重PCR反应合并：选取T1反应管体系运行PCR扩增反应，获得反应产物A；T2反应管体系运行PCR扩增反应，获得反应产物B；选取T3反应管体系运行PCR扩增反应，获得反应产物C；将上述反应产物A、反应产物B与反应产物C混合合并，获得合并产物；

S3、磁珠纯化合并产物；

S4、第二轮序列PCR反应、第二轮磁珠纯化及文库浓度测量与质检，完成文库构建。

2.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，所述T1反应管体系体积为30-40μL；

所述T2反应管体系体积为30-40μL；

所述T3反应管体系体积为25-30μL。

3.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，所述第二轮接头序列PCR反应体系体积为30-40μL。

4.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，所述多重PCR反应合并中，反应产物A、反应产物B与反应产物C混合合并体积分别为11.5μL、13.5μL和5μL。

5.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，所述第一反应液包括Enhancer buffer NB缓冲液、Enhancer buffer M缓冲液、IGT-EM808酶混合液、gDNA和ddH₂O。

6.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，第二反应液包括Enhancer buffer NB缓冲液、Enhancer buffer M缓冲液、IGT-EM808酶混合液、gDNA和ddH₂O。

7.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，第三反应液包括IGT-GC Buffer缓冲液、IGT-GC Enhancer缓冲液、IGT-GCdNTP、Enhancer buffer NB缓冲液、IGT-GC Polymerase聚合酶、gDNA和ddH₂O。

8.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，所述磁珠纯化合并产物中，磁珠纯化处理流程为：向合并产物加入磁珠，混匀、室温孵育、移除上清、加入YF buffer B混匀、二次室温孵育、移除上清、加入乙醇溶液，静置、加入Nuclease-free water，重悬磁珠，室温静置、吸取上清液，转移到新的PCR管内，管内上清液为合并后的多重PCR产物。

9.根据权利要求1所述的一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法，其特征在于，所述第二轮磁珠纯化处理流程为：向PCR反应体系内加入磁珠，混匀、室温孵育、移除上清、加入YF buffer B，混匀、二次室温孵育、静置、加入Nuclease-free water或1×TE buffer(pH 8.0)，混匀、重悬磁珠、吸取上清液，转移到新的PCR管中，管中上清为制备好的多重PCR文库。

10.一种遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含上述权利要求1-9任一所述的遗传性肥厚型心肌病的通用基因检测文库的构建方法中的T1反应管体系、T2反应管体系和T3反应管体系。