[发明专利]高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体及其应用

权利要求书

1.高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2的第130位丝氨酸、第135位丝氨酸、第197位苯丙氨酸、第326位苏氨酸、第344位苏氨酸、第476位异亮氨酸中任意一个位点突变。

2.如权利要求1所述的高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2突变体(S130T)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；是将肝素骨架合酶PmHS2氨基酸序列的第130位丝氨酸突变成苏氨酸。

3.如权利要求1所述的高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2突变体(S135A)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；是将肝素骨架合酶PmHS2氨基酸序列第135位丝氨酸突变成丙氨酸。

4.如权利要求1所述的高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2突变体(F197Y)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；是将肝素骨架合酶PmHS2氨基酸序列第197位的苯丙氨酸突变为赖氨酸。

5.如权利要求1所述的高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2突变体(T326S)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；是将肝素骨架合酶PmHS2氨基酸序列第326位的苏氨酸突变为丝氨酸。

6.如权利要求1所述的高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2突变体(T344S)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；是将肝素骨架合酶PmHS2氨基酸序列第344位的苏氨酸突变为丝氨酸。

7.如权利要求1所述的高活性肝素骨架合酶PmHS2突变体，其特征在于，所述突变体为肝素骨架合酶PmHS2突变体(I476F)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；是将肝素骨架合酶PmHS2氨基酸序列第476位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸。

8.一种重组载体，其特征在于，是在质粒载体中插入权利要求2-7任一项所述肝素骨架合酶PmHS2突变体的编码基因；

优选的，所述质粒载体为pET-28a(+)。

9.一种重组菌株，其特征在于，是将权利要求8所述的重组载体转化入宿主细胞中获得；

优选的，所述宿主细胞为大肠杆菌。

10.权利要求1～7任一项所述的肝素骨架合酶突变体在合成肝素骨架中的应用；

优选的，所述应用是以UDP-GlcNAc作为供体底物，GlcA-pNP作为受体底物，催化反应生成结构为GlcNAc-GlcA-pNP的肝素骨架；或者将UDP-GlcA作为供体底物，GlcNAc-GlcA-pNP作为受体底物，催化反应生成结构为GlcA-GlcNAc-GlcA-pNP的肝素骨架。