[发明专利]一种双靶点mRNA疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种双靶点mRNA疫苗，包括脂质体混合物和双靶点mRNA；所述脂质体混合物，包括DLin‑MC3‑DMA、DSPC、胆固醇、PEG200‑DMG，摩尔比为50:10:37.5:2.5；所述双靶点mRNA由线性化的重组质粒转录得到；所述重组质粒包含目的基因片段；所述目的基因片段由以下模块依次串联得到：5′–UTR核酸人工序列、P53核酸人工序列、Linker核酸人工序列、Kras核酸人工序列、MITD核酸人工序列、3′–UTR核酸人工序列；本发明还提供上述疫苗的制备方法；本发明制备的mRNA疫苗，能够阻滞mRNA的迁移，并保护mRNA不被降解，提高了mRNA的递送效率。

技术领域

本发明涉及一种双靶点mRNA疫苗及其制备方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

肿瘤疫苗是用肿瘤细胞、肿瘤细胞裂解物或肿瘤抗原来激活机体免疫系统产生特异性抗肿瘤细胞免疫反应的一种治疗性的肿瘤治疗方法，包括全细胞疫苗、多肽类疫苗、RNA/DNA基因疫苗和树突状细胞疫苗。其中，mRNA疫苗作为一种新型的核酸疫苗，能够表达任何蛋白质，可以从基因水平上治疗几乎所有基于蛋白质的疾病。相较于其他传统疫苗和DNA疫苗技术，mRNA疫苗的合成不仅生产工艺简单，且价格低廉。同时这种人为设计的核酸并不会诱发人体的免疫反应，不进入细胞核，无整合到基因组的风险，相对更安全。但mRNA自身稳定性差、易被体内外的核酸酶降解、穿透细胞膜能力较差是制约其发展的瓶颈。因此，mRNA疫苗需要有合适的递送载体将其递送至体内，才能有更好的免疫反应。

目前，肿瘤mRNA疫苗使用最广泛是阳离子脂质和聚合物为基础的纳米制剂技术，可保护核酸药物免遭核酸酶的降解，成功实现包括siRNA、mRNA、Cas9质粒等核酸药物在体内的稳定递送。阳离子脂质纳米颗粒（LNPs）由阳离子脂质、聚乙二醇（PEG）、胆固醇等组成，包裹着核酸药物被细胞膜内吞进入细胞内形成内体囊泡，伴随着一系列的结构变化，促使mRNA从内体中解脱出来并与负责生产蛋白的核糖体结合，指导病毒蛋白的合成。LNPs具有良好的生物相容性和理化性质，在体内外均展现了较高的基因转染效果，被证明是最安全的药物递送载体。已有被FDA批准上市的RNA药物（Patisiran注射液）用于在体内递siRNA或其他小寡核苷酸，但用于mRNA疫苗递送的材料还非常有限。由于mRNA易被降解及自身物理化学特征，现有的纳米材料对于mRNA递送效率有限，以mRNA为基础的肿瘤疫苗的发展与临床应用仍面临许多问题。因此，亟需开发一种新的治疗方法来实现mRNA的有效递送及编码抗原的高效表达。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种双靶点mRNA疫苗及其制备方法，实现以下发明目的：

（1）本发明制备的mRNA疫苗，包封率高；

（2）本发明制备的LNP脂质体能够阻滞mRNA的迁移，并保护mRNA不被降解；提高细胞的转染效率；

（3）本发明mRNA疫苗产生的抗体蛋白高于裸露mRNA；

（4）本发明mRNA疫苗能够有效地诱导T细胞产生免疫应答；

（5）本发明mRNA疫苗对肿瘤细胞的杀伤率高。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种双靶点mRNA疫苗，包括脂质体混合物和双靶点mRNA；所述脂质体混合物，包括DLin-MC3-DMA、DSPC、胆固醇、PEG200-DMG，摩尔比为50 : 10 : 37.5 : 2.5；