[发明专利]一种生物分子提取方法

说明书

本发明公开了一种生物分子提取方法，包括如下步骤：S1、向稀释组件中加入样本和稀释液；在缓冲组件中加入缓冲液；S2、第一次离心处理，样本和稀释液进入第一过滤组件过滤处理；S3、停止第一次离心；进行第二次离心；S4、停止第二次离心；进行第三次离心，混合液的其他物质进入滤液收集组件；S5、停止第三次离心，向第一洗脱组件和第二洗脱组件中加入第一洗脱液和第二洗脱液；S6、进行第四次离心；在进行加速第五次离心；S7、停止第五次离心，进行第六次离心；S8、从洗脱液收集组件中提取外泌体。该生物分子提取方法，只需加入样本和配套试剂，盘片配套仪器自动完成样本的稀释、混合、过滤膜、滤液的收集和洗脱液的收集，无需专业的操作人员。

技术领域

本发明涉及医疗器械对外泌体提取方法领域，具体为一种生物分子提取方法。

背景技术

目前，离心式微流控芯片常应用于POCT领域，无需专业技术人员操作就能方便快捷的输出检测结果。其特点在于将储液池、检测池和阀等微流控结构集成到圆盘状芯片上，以离心力驱动微流体的流动，从而实现对样品的检测分析。离心式微流控芯片能够完成样本的前处理、混匀、精确的体积定量和检测等操作。近年来离心式微流控芯片以其集成化、多平行检测、高通量、低成本、自动化、等优点获得了快速发展，已广泛应用于生化检测、免疫分析、核酸检测、生物分子富集和食品安全等领域。

细胞外囊泡是蛋白质、mRNA、miRNA和脂质运输来完成细胞间通讯通路的重要媒介，根据它们的大小和发生分为三类，包括外泌体、微泡和凋亡小体。其中，外泌体是直径大约为40-100nm的包装囊泡，由多种细胞分泌，内含有特定的蛋白质、脂质、细胞因子或遗传物质。来源于不同的组织的外泌体不仅具有其特异性蛋白分子，而且还包含其行使功能的关键分子。近年来，随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及肿瘤治疗领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域；临床研究上已涉及心血管系统、内分泌代谢系统等。

现有技术中，商品化的外泌体提取试剂盒需要大型冷冻离心机，并且操作步骤多，耗时长，需要专业实验人员进行手工操作，并且操作过程中容易出错，导致提取的外泌体量不足、外泌体纯度不够等问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种芯片集成多种微阀和滤膜，解决人样本中外泌体的生物分子提取操作复杂、提取外泌体量不足，提取的外泌体纯度不够等问题的生物分子提取方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种生物分子提取方法，包括如下步骤：

S1、向稀释组件中加入样本和稀释液；在缓冲组件中加入缓冲液；

S2、第一次离心处理，样本和稀释液进入第一过滤组件过滤处理；并进入缓冲组件，与缓冲液混合形成混合液；

S3、停止第一次离心；进行第二次离心，混合液进入第二过滤组件；混合液的分泌体富集在所述第二过滤组件内部，其他物质进入分液组件；

S4、停止第二次离心；进行第三次离心，混合液的其他物质进入滤液收集组件；

S5、停止第三次离心，向第一洗脱组件中加入第一洗脱液，向第二洗脱组件中加入第二洗脱液；

S6、进行第四次离心；第一洗脱液进入第二过滤组件，第二洗脱液仍然留在第二洗脱组件中；在进行加速第五次离心，第一洗脱液通过第二过滤组件进入分液组件；

S7、停止第五次离心，进行第六次离心，第二洗脱液进入第二过滤组件进一步进入分液组件，第一洗脱液和第二洗脱液均进入洗脱液收集组件；

S8、从洗脱液收集组件中提取外泌体。

所述稀释组件出口端连接第一过滤组件，所述第一过滤组件的出口端连接缓冲组件，所述缓冲组件的出口端连接分液组件，所述分液组件的还连接所述第二洗脱组件的出口端，所述分液组件的出口端分别连接滤液收集组件和洗脱液收集组件；