[发明专利]一种用于重组蛋白表达的启动子及其应用

权利要求书

1.一种用于重组蛋白表达的甲醇诱导型启动子P₀₅₄₇，其特征在于，所述甲醇诱导型启动子P₀₅₄₇的序列如NCBI登录号为NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示。

2.一种用于重组蛋白表达的组成型启动子P₀₄₇₂，其特征在于，所述组成型启动子P₀₄₇₂的序列如NCBI登录号为NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

3.一种甲醇诱导型启动子P₀₅₄₇或组成型启动子P₀₄₇₂在大规模生物反应器和/或小规模生物反应器的重组蛋白表达中的应用，其特征在于，所述P₀₅₄₇启动子的序列如NCBI登录号为NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示，所述P₀₄₇₂启动子的序列如NCBI登录号为NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述大规模生物反应器为3-5L的生物反应器；所述小规模生物反应器为≥0.1L且小于3L的生物反应器。

5.一种GS115-启动子-GFP表达菌株，其特征在于，其是以引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示的PAGR1和PGFPF2为引物扩增绿色荧光蛋白GFP表达框，通过一步克隆试剂盒将所述GFP表达框、P₀₅₄₇启动子连接至pPIC 9K载体中构建后转化GS115菌株获得；或者，其是以引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示的PAGR1和PGFPF2为引物扩增绿色荧光蛋白GFP表达框，通过一步克隆试剂盒将所述GFP表达框、P₀₄₇₂启动子连接至pPIC9K载体中构建后转化GS115菌株获得，所述P₀₅₄₇启动子的序列如NCBI登录号为NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示，所述P₀₄₇₂启动子的序列如NCBI登录号为NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

6.一种GS115-启动子-AMY表达菌株，其特征在于，其是通过PCR扩增重组α-淀粉酶表达框，并与启动子P₀₄₇₂一起连接到pPIC 9K载体构建后转化GS115菌株获得；或者，其是通过PCR扩增重组α-淀粉酶表达框，并与启动子P₀₅₄₇一起连接到pPIC 9K载体构建后转化GS115菌株获得，其中，所述P₀₅₄₇启动子的序列如NCBI登录号为NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示，所述P₀₄₇₂启动子的序列如NCBI登录号为NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

7.一种如权利要求5所述的GS115-启动子-GFP表达菌株在大规模生物反应器和/或小规模生物反应器的重组蛋白表达中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述大规模生物反应器为3-5L的生物反应器；所述小规模生物反应器为≥0.1L且小于3L的生物反应器。

9.一种如权利要求6所述的GS115-启动子-AMY表达菌株在大规模生物反应器和/或小规模生物反应器的重组蛋白表达中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述大规模生物反应器为3-5L的生物反应器；所述小规模生物反应器为≥0.1L且小于3L的生物反应器。