[发明专利]一种发酵生产尼克酰胺磷酸核糖转移酶的方法

权利要求书

1.一种发酵生产尼克酰胺磷酸核糖转移酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将NAMPT生产菌株接种至发酵培养基中进行培养，初始发酵温度为32-34℃，搅拌转速为200-400rpm，发酵过程中控制溶氧为20-40%，pH值为6.8-7.2；发酵培养至发酵液稀释100倍后的OD₆₀₀值为0.18-0.20；

（2）将发酵体系的温度降至21℃-23℃，加入IPTG，同时流加补料，调控补料的流加速度使发酵体系的溶氧控制在20-40%，诱导培养20-30h，即生产得到含有NAMPT酶的发酵液；

步骤（1）中，所述NAMPT生产菌株由如下方法构建而成：

将SEQ ID NO.1所示的编码NAMPT的核苷酸片段连入质粒pLLP-ompA，获得第一重组表达载体；将SEQ ID NO.2所示的编码PARP1的核苷酸片段连入质粒pET-42a（+），获得第二重组表达载体；再将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入大肠杆菌，即构建得到NAMPT生产菌株；

步骤（1）中，所述发酵培养基的组成为：甘油 10g/L，酵母浸膏 8g/L，氯化钠 3g/L，硫酸铵 2.5g/L，三水磷酸氢二钾 4g/L，柠檬酸铁铵 0.3 g/L，柠檬酸2.1 g/L，蛋白胨12 g/L，七水硫酸镁0.5 g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，加入IPTG，使IPTG在发酵体系中的终浓度为0.5mmol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述补料由甘油和水按体积比1:1配制而成。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，补料的加入量为发酵培养基重量的10-20%。