[发明专利]一种改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法

说明书

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法。本发明对现有Griess试剂检测亚硝酸盐的方法进行改进，利用铜碘掺杂碳点的拟氧化酶催化氧化特性，加速亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应及与盐酸萘乙二胺偶合反应，提高了检测的灵敏度，使其检测灵敏度提高了7‑8倍，亚硝酸盐检出限从GB/T5009.33‑2016食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定方法中最低的0.06mg/kg降至0.01mg/kg，尤其适合体内血液、尿液及食品中低含量亚硝酸盐的测定。将本方法检测结果与GB 5009.33‑2016第一法离子色谱法相符。方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

技术领域

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法。

背景技术

一氧化氮(nitric oxide，NO) 是人体内重要的信号分子，在心血管、神经和免疫系统中发挥着不可替代的调节作用，因其重要的生理功能，NO被Science 评为 1992 年度“明星分子”。 NO具有结构简单、分子量低、亲脂性及自由基等特点，在体内极不稳定，半衰期仅有几秒钟，易形成亚硝酸盐，通过体内亚硝酸盐检测反映NO变化。食品中亚硝酸盐检测也非常重要，亚硝酸盐可与相关的化学物质生成致癌物质，国家也在不断提高重视。目前，亚硝酸盐的检测方法主要有离子色谱法和分光光度法。食品中亚硝酸盐的测定国家标准方法为盐酸萘乙二胺分光光度法，原理是试样经沉淀蛋白质、除去脂肪，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较以分光光度法定量。

纳米酶是一类既有纳米材料的独特性能，又有催化功能的模拟酶，纳米酶作为一类新型的模拟酶，它具有许多其他传统模拟酶所无法企及的优点，人们可以根据纳米材料模拟酶的特性进行研究并加以利用，让纳米酶具有更大的应用前景；四氧化三铁具有过氧化氢纳米模拟酶特性已得到证实，但由于酶活较低使其直接应用受到限制。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法，本发明对现有Griess试剂检测亚硝酸盐的方法进行改进，利用铜碘掺杂碳点的拟氧化酶催化氧化特性，加速亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应及与盐酸萘乙二胺偶合反应，提高了检测的灵敏度，使其检测灵敏度提高了7-8倍，亚硝酸盐检出限从GB/T5009.33-2016食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定方法中最低的0.06mg/kg降至0.01mg/kg，尤其适合体内血液、尿液及食品中低含量亚硝酸盐的测定。将本方法检测结果与GB5009.33-2016第一法离子色谱法相符。方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

本发明改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法如下：

（1）亚硝酸盐工作曲线制作：在5 mL具塞比色管中加入4g/L 对氨基苯磺酸400 μL，0.025~1.25 mg/L亚硝酸盐标准溶液，摇匀，静置5-10 min，2 g/L盐酸萘乙二胺200 μL，用去离子水稀释至4mL，摇匀，静置10-15 min，在530nm波长处，测定吸光度A，以亚硝酸盐浓度为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。

（2）样品处理

血液样品：取新鲜血液5 mL于有抗凝剂的离心管中，6000 rpm离心5 min，取上清液2mL，加入由0.2 mol/L的NaOH 1mL与10%硫酸锌1mL组成的蛋白沉淀及血液脱色剂，涡旋混合30-60秒，6000 rpm离心5 min之后，将上清液移于另一离心管中；加入去离子水1 mL至沉淀中，并加入1 mol/L的HCl 0.5 mL，涡旋30-60秒至沉淀溶解，再加入0.2 mol/L的NaOH 0.5 mL与10%硫酸锌0.5 mL，涡旋30-60秒，6000 rpm离心5 min，取上清液与第一次处理上清液合并，为样品待测液。