[发明专利]一种改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法

权利要求书

1.一种改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法，包括以下步骤：

（1）亚硝酸盐工作曲线制作：在5 mL具塞比色管中加入4g/L 对氨基苯磺酸400 μL，0.025~1.25 mg/L亚硝酸盐标准溶液，摇匀，静置5-10 min，2 g/L盐酸萘乙二胺200 μL，用去离子水稀释至4mL，摇匀，静置10-15 min，在535 nm波长处，测定吸光度A，以亚硝酸盐浓度为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程；

（2）样品处理

血液样品：取新鲜血液5mL于有抗凝剂的离心管中，6000 rpm离心5 min，取上清液2mL，加入由0.2 mol/L的NaOH 1mL与10%硫酸锌1mL组成的蛋白沉淀及血液脱色剂，涡旋混合30-60秒，6000 rpm离心5 min之后，将上清液移于另一离心管中；加入去离子水1 mL至沉淀中，并加入1 mol/L的HCl 0.5 mL，涡旋30-60秒至沉淀溶解，再加入0.2 mol/L的NaOH0.5 mL与10%硫酸锌0.5 mL，涡旋30-60秒，6000 rpm离心5 min，取上清液与第一次处理上清液合并，为样品待测液；

液体饮料样品：取 10.0 mL 的待测样品置于 100 mL 烧杯中，加入5 mL饱和硼砂溶液，用玻璃棒搅拌均匀后引流至500 mL 的烧杯中，用蒸馏水洗3-4次，加入5 mL 的 220g/L乙酸锌溶液，搅拌10 min，离心，上清液过0.22 μm滤膜，得样品液；

蔬菜样品：称取5g （精确到0.001 g）蔬菜样品，置于研钵中，充分研磨，将残渣、汁液转移到烧杯中，加入生菜样品质量10倍去离子水，70℃加热30min，冷却，过滤，滤液移至100mL容量瓶内，去离子水定容至刻度线，得亚硝酸盐提取液；

样品脱色处理：取步骤及制备的样品液加入少量改性活性炭，涡旋混合1-2min，离心分离，取出上清液，制得样品测定液；

（3）样品测定：在5 mL具塞比色管中加入4g/L 对氨基苯磺酸400 μL，加入步骤（2）制备样品测定液，摇匀，静置5-10 min，2 g/L盐酸萘乙二胺200 μL，用去离子水稀释至4mL，摇匀，静置10-15 min，在535 nm波长处，测定吸光度A，代入步骤（1）回归方程，计算样品亚硝酸盐含量。

2.根据权利要求1所述的改进Griess试剂检测亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述的铜碘掺杂碳点的制备方法如下：称取1g 醋酸铜、5~8g 3,5 -二碘- DL -酪氨酸溶于400~600mL超纯水中，混合均匀后，加入1~1.5mL乙二胺，超声10~20min，并转移至聚四氟乙烯反应釜中在200℃下加热10~12h，自然冷却后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3000Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性Cu-I/CDs。

3.根据权利要求1所述的快速检测食品中亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述改性活性炭为：取活性炭，在0.1mol/L HCl 或HNO₃溶液中浸泡2 h后，室温下震荡12-20 h，过滤，再浸泡于0.1 mol/L高锰酸钾2 h，过滤，蒸馏水冲洗至活性炭表面为中性，进行抽滤，100℃下干燥3-6 h，即得改性活性炭，其中改性活性炭与样品液的重量比为0.5-3：10。