[发明专利]观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法

说明书

本发明公开了观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，挑选成熟的比较饱满的种子；温室，播种前催芽，种子尖的一头朝下，插进土壤中，再覆一层薄土，用喷壶喷水，让土壤保持湿润的状态，温室光照下出芽。本发明以观赏向日葵腋芽为外植体，研究了不同种类和浓度的植物生长调节剂对向日葵组织培养过程的影响，建立了其离体快速繁殖的技术体系；在向日葵快繁体系建立的基础上，建立向日葵愈伤胚性体细胞的诱导，以建立稳定、高效组织培养再生体系；在向日葵组织再生体系建立的基础上，不断优化再生体系条件，以建立稳定、高效再生体系为目标，进行基因重组载体构建，并建立向日葵的遗传转化体系，为深入基因功能研究提供服务。

技术领域

本发明涉及观赏向日葵领域，尤其涉及观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法。

背景技术

观赏向日葵又名彩色向日葵，包括向日葵属、向日葵种和部分近缘种。其花盘形似太阳，花朵亮丽，颜色鲜艳，力度感好，纯朴自然，具有较高的观赏价值。在国外，观赏向日葵深受人们的喜爱，广泛用于切花、盆花、染色花、庭院美化及花境营造等领域。我国观赏向日葵市场刚刚起步，具有一定的开发潜力。观赏向日葵为菊科，向日葵属，一年生花卉，株高60至300厘米，花期25-35天，花色有黄色、橙色、红色、粉色及复色等。一般连片种植，开花时花色鲜艳，既有野趣，又极为壮观。

利用生物技术手段获得优质的向日葵品种，一直是向日葵栽培育种研究的目标，而生物技术的重要手段之一就是离体组织培养，目前观赏向日葵组织高校再生体系较少，未对其组织建立高效的再生体系。为此，我们提出观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，以解决背景技术中提出的问题。

本发明提供如下技术方案：

观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，包括如下步骤：

A、向日葵种植：

a、选种：挑选成熟的比较饱满的种子；

b、播种：温室，播种前催芽，种子尖的一头朝下，插进土壤中，再覆一层薄土，用喷壶喷水，让土壤保持湿润的状态，温室光照下出芽；

c、移栽：向日葵长出三对真叶之后开始移栽；

d、取样：进行快繁与愈伤诱导实验；

B、以腋芽为外植体---进行不定芽诱导：

a、样品处理

(1)田间选取顶花即将开放或者已经开放的向日葵植株；

(2)采回后将整个植株分成几段，保留带腋芽茎段；

(3)用洗洁精清洗干净，然后用清水冲洗0.5h；

b、外植体制备

(1)将所有腋芽切下后，无菌水冲洗一遍，先用75％乙醇浸泡30-60s，再用10％过氧化氢或者3％次氯酸钠溶液消毒15-20min或HgCl2消毒浸泡10-15min，无菌水冲洗4-5次；然后在超净工作台上吸取多余水分；

(2)切取腋芽5mm大小的顶部作为外植体，接种到合适的培养基上；

C、不同激素浓度对不同基因型观赏向日葵腋芽诱导不定芽的影响：

以腋芽为外植体，在加入等量0.03mg/L NAA的MS培养基中添加不同浓度的6-BA，浓度处理包括0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mg/L共6个浓度梯度，以不同供试基因型4-6d的腋芽作为外植体材料，研究不定芽的诱导效果；

D、不定芽的伸长诱导：