[发明专利]观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法

权利要求书

1.观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、向日葵种植：

a、选种：挑选成熟的比较饱满的种子；

b、播种：温室，播种前催芽，种子尖的一头朝下，插进土壤中，再覆一层薄土，用喷壶喷水，让土壤保持湿润的状态，温室光照下出芽；

c、移栽：向日葵长出三对真叶之后开始移栽；

d、取样：进行快繁与愈伤诱导实验；

B、以腋芽为外植体---进行不定芽诱导：

a、样品处理

(1)田间选取顶花即将开放或者已经开放的向日葵植株；

(2)采回后将整个植株分成几段，保留带腋芽茎段；

(3)用洗洁精清洗干净，然后用清水冲洗0.5h；

b、外植体制备

(1)将所有腋芽切下后，无菌水冲洗一遍，先用75％乙醇浸泡30-60s，再用10％过氧化氢或者3％次氯酸钠溶液消毒15-20min或HgCl2消毒浸泡10-15min，无菌水冲洗4-5次；然后在超净工作台上吸取多余水分；

(2)切取腋芽5mm大小的顶部作为外植体，接种到合适的培养基上；

C、不同激素浓度对不同基因型观赏向日葵腋芽诱导不定芽的影响：

以腋芽为外植体，在加入等量0.03mg/L NAA的MS培养基中添加不同浓度的6-BA，浓度处理包括0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mg/L共6个浓度梯度，以不同供试基因型4-6d的腋芽作为外植体材料，研究不定芽的诱导效果；

D、不定芽的伸长诱导：

设置3-4个组合，摸索适合不定芽伸长诱导的最佳条件，MS+0.1mg/L BA+0.08mg/LNAA。

E、再生诱导：

MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA+1.0gMgCl2

MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA+1.0g MgCl2

F、生根诱导：

1/2MS+0.5mg/L IBA

G、再生株系的练苗培养：获得根系发达的向日葵再生植株，开盖练苗2-3日，喷施水保持叶面湿润，洗净根系培养基，水培成活后移栽；

H、实验结果：愈伤组织获得，再生植株获得。

2.根据权利要求1所述的观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于：所述步骤B中设置不同的激素配比与浓度，3-4个组合的培养基，1/2MS固体培养基含1.8g/L琼脂，灭菌前调节pH值至5.8-6.0。

3.根据权利要求1所述的观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于：所述步骤B中将向日葵外植体接种于含有不同激素的培养基广口瓶中，外植体在培养25-30d后，分化出初生不定芽，继续培养10-15d后继代培养1次，温度25-28℃，日光/黑夜光照时间12h/12h，光照强度1600lux。

4.根据权利要求1所述的观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于：所述步骤C中在不同的细胞分裂素和生长素的配比情况下，不同材料诱导出不定芽的难易程度和出芽时间并不一致。