[发明专利]一种单细胞计数的方法及其系统

权利要求书

1.一种用于单细胞计数的微流控芯片装置，其特征在于，所述由注射泵和储液池(1)、引流导管(2)、微流控芯片(7)组成，所述微流控芯片(7)具有样本流入口(3)和输出口(5)，荧光检测区(4)，其中微流控芯片内置流道(11)，分别与样本流入口(3)、输出口(5)连通，样本流入口(3)方向的引流导管(2)将注射泵和储液池(1)与样本流入口(3)相连；微流控芯片(7)内置的流道(11)，其入口端和出口端流道尺寸到中央处宽度和高度逐渐减小，至中央处流道宽度高度达到最小且保持恒定不变，优选其宽度高度均为20-35微米；该中央处流道的中部为荧光检测区。

2.如权利要求1所述的微流控芯片装置，其特征在于，微流控芯片(7)内置的流道(11)的长度为2.5至3.5cm，中央处的长度为200-400微米；样本流入口(3)和输出口(5)为圆柱形；优选，还具有流量调节装置，以调节液流的流速。

3.如权利要求1所述的微流控芯片装置，其特征在于，进一步包括废液存储池(6)，从微流控芯片输出口(5)流出样品，经引流导管(2)进入废液存储池(6)。

4.一种基于微流控芯片的单细胞计数的系统，其特征在于，其包括如权利要求1至3任一项所述的用于单细胞计数的微流控芯片装置、荧光检测装置、和数据处理装置；其中，荧光检测装置用于检测输出口中的样品；数据处理装置包括实时采集计数模块和修正计数的数学计算处理模块，进一步包括数据显示装置。

5.根据权利要求4所述的系统，其特征在于：所述修正计数的数学计算处理模块包括下述数据修正模型：

先根据公式(1)排除识别相邻光子间存在的时间间隔(DT)造成的计数影响：

其中，DT是识别相邻光子间存在的时间间隔，N₀指经DT优化后的计数结果，Nr指DT优化前的计数结果，τ为平均波峰宽度，T为总的计数时间；

再根据公式(2)以得到修正后的计数结果N_c：

Nc＝N₀+N_dw+N_dh-N_noise (2)

其中，N_dw和N_dh分别表示通过峰宽和峰高鉴定的冲突事件和二聚体的计数值；N_noise是通过设置缓冲液中只含有荧光染料的空白对照管，根据背景信号的强度设定阈值后检测空白对照管的计数；

然后，通过流量计以确定检测的样本体积V，并得出核酸样本的浓度Cc:

其中，D为稀释倍数。

6.如权利要求4所述的系统，其特征在于，所述荧光检测装置采用光电倍增管对荧光显微镜获取的荧光信号进行光电转换，再通过电路采集卡进行数据采集。